JNK结合蛋白1(JIP1)调节帕金森氏病多巴胺能神经元凋亡和阿尔茨海默病Tau蛋白磷酸化与研究.pdf

·中文论著摘要· JNK结合蛋白I(JIPl)调节帕金森氏病多巴胺能神经 元凋亡和阿尔茨海默病Tau蛋白磷酸化的研究 刖 吾 神经退行性疾病是指随年龄老化和神经细胞进行性变性死亡所引起的中枢神 经功能减退导致的疾病，包括帕金森氏病、阿尔茨海默病、小脑萎缩症及肌肉萎 缩性侧索硬化症等。随着人们生活水平的提高和社会人口老龄化的加剧，以帕金 森氏病和阿尔茨海默病等为代表的神经退行性疾病已成为仅次于心血管疾病、恶 性肿瘤和中风之后的主要致死疾病，给患者和社会造成严重的负担。 帕金森氏病(Parkinson’Sdisease，PD)是一种与年龄相关的神经退行性疾病， 其病理特征为黑质多巴胺(dopamine，DA)能神经元的进行性死亡，导致椎体外束 运动功能障碍，临床症状主要包括肌肉强直、静止性震颤及运动迟缓等。PD黑质 细胞死亡的原因尚不清楚，普遍认为与以下机制有关：环境毒素、遗传因素、基 因突变、氧化应激、免疫异常、铁离子聚集以及神经兴奋性毒性等。阿尔茨海默 病(Alzheimer’Sdisease，AD)，又称早老性痴呆，是一种发生于老年人群的以进 行性痴呆为主要特征的神经系统退行性疾病，其主要临床特征是进行性记忆丧失、 认知缺陷及严重的精神障碍，至今尚无有效的治疗手段。 PD的确切发病机制还不明确，但是许多研究显示黑质多巴胺能神经元的凋亡 N．terminal 在PD的发病过程中发挥了重要的作用。最近有研究显示JNK(c．Jun 凋亡过程，给予JNK的特异性抑SJJ齐U之后PD的发病会受到抑制或减慢。JNK结 kinase)和 kinase MKK7(Mitogen．activatedkinase7)结合形成复合物，参与调节JNK通 protein 路激酶活性，研究显示JIPI是JNK激酶激活所必需。在PD中，JIPl是否会通过 影响JNK活性而调节多巴胺能神经元凋亡尚未见报道。 AD的主要病理学特征是患者大脑皮层细胞外出现老年斑，神经元内出现神经 原纤维缠结(neurofibrillarytangle，NFT)，伴有神经元死亡和神经胶质细胞活化 形成病理性结合，竞争抑制了JIPI与kinesinl之间的结合，从而影响kinesin1介 导的正常生理状态下的轴突运输。虽然以上研究结果提示JIPI通过蛋白结合作用 介入了轴突发育和轴突运输的调节，但JIPI对Tau蛋白磷酸化的影响机制尚有待 于深入研究。 实验方法 为研究对象，应用旷场实验和牵引实验检测PD小鼠的行为学变化；应用免疫组 织化学技术及Western blotting技术检测JIPl对PD小鼠的神经元保护作用及其机 制。采用MTT方法检测冈F只酸对细胞的毒性作用以确定冈田酸的应用浓度，应用 W铭tern blotting和免疫荧光技术检测JIPl对Tau蛋白磷酸化的调节。 实验结果 1、JIPl基因敲除小鼠的鉴定 从鼠尾提取DNA，利用PCR的方法鉴定JIPl基因敲除小鼠的基因型。 2、JIPl基因敲除对PD模型小鼠行为学的影响 旷场实验结果表明，在野生型小鼠中，与正常对照组小鼠相比，MPTP模型 组小鼠的水平运动和垂直运动评分(即爬格数和直立数)显著降低。牵引实验结果显 示，MPTP模型组小鼠评分显著低于正常对照小鼠；而在基因敲除小鼠中，MPTP 模型组与对照组小鼠的牵引评分无显著差异。这些结果表明JIPl基因敲除能够明 显抑制MPTP诱导的PD行为学变化。 3、JIPl基因敲除对MPTP诱导的多巴胺能神经元凋亡的影响 MPTP模型组小鼠 免疫组织化学染色(IHC)结果显示：在野生型小鼠中， 黑质和纹状体多巴胺能神经元和神经纤维较对照组小鼠显著减少，而在JIPl基因 敲除小鼠中，MPTP模型组小鼠的黑质和纹状体神经元和神经纤维的数量减