鼻咽癌细胞株可能相关瘤基因%2f抑瘤基因的初步筛选和PTHLH的过表达及研究.pdf

硕士研究生：樊英 指导教师：黄仲曦副教授 摘要 鼻咽癌(Nasopharyngealcarcinoma,NPC)是一种上皮源性恶性肿瘤，绝大 多数属于低分化鳞状细胞癌，恶性程度高，早期易发生淋巴结和全身远处转移， 具有相当高的死亡率。鼻咽癌的地区分布极不均衡，在我国南方及东南亚一带 发病率较高，其中又以广东省的发病率最高，故有“广东瘤”之称。目前认为遗传 Virus)感染、遗传易感性、饮食和某些环境化学促癌 因素、EBV(Epstein-Barr 物和戚致癌物因素与鼻咽癌的发生发展密切相关，在这些因素的共同作用下，正 常鼻咽上皮细胞发生遗传和表观遗传学改变不断积累，最终引起细胞的恶性转 化，导致鼻咽癌的发生。但NPC的发病机制尚不清楚。 肿瘤的发生发展是一个多因素参与、多基因改变、多步骤演进的复杂过程， 受到体内、外各种因素的作用和影响，是许多肿瘤瘤基因激活或肿瘤抑制基因 失活所致。瘤基因是由于存在正常细胞中的原瘤基因在某些致瘤因素作用下激 活而成，瘤基因的活化是人类肿瘤发生发展的重要因素，瘤基因数量的增加或 表达活性的增加或突变，均会导致肿瘤的发生。抑瘤基因是作用细胞增殖和分 化的重要调控因子，在正常细胞中起阻滞细胞增殖，促进细胞分化的功能。抑 瘤基因的缺失或突变失活可使瘤基因充分发挥作用也会导致恶性肿瘤的发生发 展。在鼻咽癌的发生发展，瘤基因和抑瘤基因同样起关键作用。迄今为止，鼻 等多个基因已在基因表达变化沉默后对细胞生物学行为的影响等方面被证实具 有鼻咽癌抑瘤基因的潜质，而且发现其分子机制主要为基因的甲基化。但鼻咽 中文摘要 鼻咽癌中的扩增或过表达而被推测为鼻咽癌潜在的瘤基因，但鲜有报道过表达 后对细胞生物学行为的影响，更没有体内报道。因此，探索鼻咽癌瘤基因及其 作用机制对于揭示鼻咽癌的发病机理就显得尤为重要。 本实验组前期通过收集五个实验室发表的170例鼻咽癌比较基因组杂交 (CGH)数据构建鼻咽癌发病机制的树模型。研究结果提示了11个鼻咽癌的重 1区域的扩增是鼻咽癌发生发展的早期事件， 要染色体变异事件，其中12p12．1 谱芯片分析发现黑色素瘤瘤基因MITF。我们先前采用同样的办法，整合分析本 6．10B)和NP69的 实验室已有的五种鼻咽癌细胞(CNEl，CNE2，HONEl，5．8F 旁腺激素受体家族成员，在恶性肿瘤的体液性高钙血症、乳腺癌和前列腺癌的 骨转移中发挥作用，能促进结肠癌细胞的增殖、浸润、迁移及成瘤能力。因此， 我们推测PTHLH基因可能在鼻咽癌发生发展中起重要作用。 基于前面工作的基础上，本课题的研究目的为采用整合分析方法，筛选鼻 咽癌细胞株CNEl、CNE2、HONEl基因组中的可能相关的瘤基因及抑瘤基因， 对其进行初步的生物信息学研究。接着改变作为候选靶基因之一PTHLH的表达 水平，观察其对鼻咽癌细胞株生物学行为的影响及可能的作用机制，为深入理 解鼻咽癌发病的分子机制和寻找新的分子靶向治疗靶点奠定理论基础，为此本 课题进行了如下研究： (一)瘤基因及抑瘤基因筛选及初步生物信息学分析 通过Ensembl database整合鼻咽癌细胞株SNP芯片数据、表达谱数据及已 知正常拷贝数变化CNVs数据，筛选鼻咽癌细胞中可能相关的瘤基因及抑瘤基 因。得到160个可能相关的靶基因，其中既扩增又过表达为102个，既缺失又 低表达为58个。从160个基因当中随机抽取9个基因进行表达水平的检验，结 Ⅱ 项士学位论文 果示除ILK外都与芯片结果一致，因此芯片结果可靠。PANTHER软件分析显示 这160基因的功能包括：转录因子，核酸及脱氧核酸结合因子，膜运输蛋白及 调节蛋白，各种生物酶和激酶等，参与的通路主要包括P53通路、细胞周期、 凋亡通路等。由于这些生物学功能涉及到了肿瘤发生发展及侵袭转移的多个阶 段，因而瘤基因／抑瘤基因在鼻咽癌中的表达失调，可能通过调控下游一系列靶 基因的表达进而引起鼻咽癌细胞多方面生物学特性