BAFF%2fBAFF-R介导PI3K-Akt-mTOR信号通路上调胶原性关节炎大鼠B淋巴细胞的功能及芍药苷的作用.pdf

目 录 英文缩略词表 3 中文摘要 5 英文摘要 8 1 前言11 2 实验材料 13 2.1 动物14 2.2 药物和试剂 14 2.3 仪器与设备 16 3 实验方法 16 3.1 大鼠 CIA 模型的诱导 17 3.2 CIA 模型的评价17 3.3 动物分组及给药方案 17 3.4 大鼠关节滑膜和脾脏的组织病理学检查 17 3.5 脾脏指数和胸腺指数的计算 19 3.6 大鼠血清中抗 CII 抗体的水平检测19 3.7 大鼠血清及巨噬细胞培养上清中 BAFF 以及血清中IgA、IgG、IgM 的水平检测19 3.8 免疫组织化学检测 BAFF-R 、PI3-kinase p110δ、p-Akt1/2/3 表达 20 3.8.1 试剂及材料 20 3.8.2 操作流程 21 3.8.3 结果判断 22 3.9 蛋白免疫印迹法（Western blot ）检测大鼠脾脏淋巴细胞中 PI3-kinase p110δ和 mTORC1 蛋白表达22 3.9.1 大鼠脾脏淋巴细胞中蛋白的提取 22 3.9.2 蛋白定量（Lowry 法）22 3.9.3 Western-blot 操作步骤 23 3.10 MTT 法测脾脏 B 淋巴细胞的体外增殖 24 3.11 流式细胞术检测脾脏淋巴细胞凋亡 25 3.12 统计分析 25 4 实验结果 26 4.1 CIA 大鼠多发性关节炎指数及 Pae 对其的影响 26 4.2 CIA 大鼠继发侧关节肿胀度及 Pae 对其的影响 27 4.3 CIA 大鼠关节滑膜组织病理学及 Pae 对其的影响 27 4.4 CIA 大鼠脾脏组织病理学及 Pae 对其的影响29 4.5 CIA 大鼠脾脏指数和胸腺指数及 Pae 对其的影响 31 4.6 CIA 大鼠血清及巨噬细胞培养上清中BAFF 水平及Pae 对其的影响 32 4.7 CIA 大鼠血清中抗 CII 抗体、IgA、IgG、IgM 水平以及 Pae 对其的 影响32 4.8 CIA 大鼠血清中 BAFF 、IgA、抗 CII 抗体水平与关节炎评分的相 关性分析34 P-Akt1/2/3 表达及 Pae 对其的影 4.9 CIA 大鼠脾脏中 BAFF-R 、P110δ、 响34 4.10 CIA 大鼠脾脏淋巴细胞中p110δ和 mTORC1 蛋白表达及Pae 对其 的影响38 4.11 BAFF 和 PI3K 激动剂体外刺激脾脏 B 淋巴细胞增殖反应及 Pae 对其的影响39 4.12 BAFF 和PI3K 激动剂体外刺激脾脏B 淋巴细胞凋亡及Pae 的作用 41 5 讨论 43 5.1 CIA 大