穿山龙水溶性总皂苷对大鼠成纤维样滑膜细胞株RSC-364NF-κB调控作用的研究.pdfVIP

中文摘要 穿山龙水溶性总皂苷对大鼠成纤维样滑膜细胞株 RSC．364 NF．KB调控作用的研究 摘 研究背景：类风湿性关节炎(Rheumatoid 多发的自身免疫性疾病，其主要病理特征以慢性关节炎症为主，有滑膜细 胞增生，血管翳形成，炎性细胞浸润并侵犯周围滑膜组织等，起病反复， 给患者带来很大痛苦，对社会和家庭也是巨大的负担。RA的发病机制还 不完全清楚，已有研究表明：炎性细胞因子如IL．1D、IL一6、1NF．仅在病 变部位的持续作用对RA的维持和发展起重要作用，而炎性细胞因子的释 放是受核转录因子NF—KB控制，NF。r．B作为一种重要的核转录因子在RA 发病中的作用主要有两个途径：一是核转录因子r．B活化后可增强炎性介 质的转录水平，同时这些炎症介质又可以反过来激活NF．rB的表达，两 者构成正反馈机制导致类风湿关节炎炎症反应的进行。二是可以阻断滑膜 细胞的凋亡，导致滑膜细胞增生。核转录因子r,B能够调节细胞凋亡抑制 蛋白的表达，对肿瘤坏死因子诱导的类风湿关节炎成纤维细胞的凋亡有拮 抗作用。因此，核转录因子，(B是治疗RA具有吸引力的靶点。 穿山龙水溶性总皂苷(water-solubilitynipponicasaponin)是薯蓣科植 物穿山龙薯蓣(Rhizoma 分，具有免疫抑制作用。本课题组前期工作表明，穿山龙总皂苷对RA动 物模型有较好的治疗作用。 目的：本研究以大鼠成纤维样滑膜细胞株RSC．364为对象，用IL．17、 蛋白和NF．KBp65 苷对RA的治疗作用及机制，为临床应用穿山龙治疗RA提供实验依据。 方法： 1 物诱导RA细胞模型。 中文摘要 于37℃、C02培养箱培养24小时，制各细胞模型。 2将1 0mg／L、20 mg／L、30mg／L、40mg，／L、50mg／L穿山龙水溶性总 OD值反应细胞的存活率，比较不同浓度的穿山龙水溶性总皂昔作用不同 时间对RSC．364细胞存活率的影响，以筛选出最佳药物浓度和作用时间。 3大鼠成纤维样渭膜细胞株RSC．364接种于六孔板，不同药物组分为4 组：正常组、模型组、雷公藤甲素组、穿山龙水溶性总皂苷组。穿lIj龙水 溶性总皂苷不同浓度组分为正常组、模型组、穿山龙水溶牲总皂苷10 mg ／L、20 mg／L、30 mg／L组。 养24h，药物组分别加入雷公藤甲素、穿山龙水溶性总皂苷培养lh后加入 IKB．0【表达情况。同样培育方法检测穿山龙水溶性总皂苷不同浓度组。 4分别提取各组细胞蛋白，进行蛋白定量计算上样体积，采用westernblot 的方法检测各组NF．1cBp65蛋白和IKB．c【蛋白的表达。 mRNA和IKB．0【mRNA的表达。 NF-r,Bp65 6应用SPSSll．5软件进行统计学分析，判断结果是否有统计学差异 (尸0．05)，结果用平均数士标准差(；士S)表示，组间差异用单因素方差 分析，两两比较用q检验，以or=0．05作为检验标准。 结果： 1不同浓度穿tlJ龙水溶性总皂苷对细胞存活率的影响。 分别将浓度为10 mg／L、20mg／L、30mg／L、40mg／I，、50mg／L的 穿山龙水溶性总皂苷作用于RSC．364细胞，用MTT法检测细胞存活率， 所有浓度组细胞存活率均明显降低，较对照组差别有统计学意义 (氏0．05)。药物作用于细胞24小时时10 mg／L、20mg／L、30mg／L浓 度绍OD值同对照组比较差别无统计学意义(pO．05)无明显的细胞毒性． 40 mg／L、50mg／L浓度使细胞存活率明显下降，表现出明显细胞毒性， 中文摘要 OD值同对照组比较有统计学差异(尸0．05)。 2穿山龙水溶性总皂苷对细胞NF．KBp65蛋白表