抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用.pdfVIP

138 LabeledImmunoassavs＆ClinMed，Jan．2015．Vo1．22．No．2 · 方法研 究 · 抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用 杨超一 ，张雪峰 ，李子颖 ，冯婷婷 (1．原子高科股份有限公司，北京 102413；2．中国原子能科学研究院，北京 102413；3．中国同辐股份有限公司，北京 100045) 摘要：目的 制备和鉴定抗肌红蛋白(Mb)单克隆抗体，为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础。方法 用人肌红蛋白抗 原免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术进行细胞融合 ，用 ELISA方法筛选 ，有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞 株。ELISA法测定小鼠腹水滴度 ，CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定。结果 筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单 克隆抗体的杂交瘤细胞株，腹水滴度为 1：5×10一1：2×10。通过配对实验，有5株抗体6种组合可以成功配对。这5株 抗体的亲和常数为6．46×10～3．68X10L／otol。用 5株抗体所建立 的6种化学免疫分析方法与人 Hb交叉反应率为 7．434 ×10。％ ～2 904×10。％ ． 与人ALB交叉反应率为4．980×10。％～3．830×10 ％。用Mbl7B6与Mb21E8两株抗体 ， 建立的CLIA标准曲线的线性系数为0．997，灵敏度为6．02ng／mL。结论 成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白 单克隆抗体。 关键词：肌红蛋白；单克隆抗体； 酶促化学发光免疫分析；酶联免疫分析 Preparation andCharacterizationofM onoclonalAntibodyAgainstM yoglobin YANG Chao—yi，ZHANG Xue—feng，LIZi—ying，FENG Ting—ting (HTACo．LTD，Beijing102413，China) Abstract：ObjectiveToprepareandcharacterizthemonoclonalantibodyagainstMbtoprovidebasisforthe developmentofMbdiagnosticreagent．MethodsBALB／cmicewereimmunizedwithhumanmyoglobin(Mb) antigen，the positive hybridoma were obtained by using hybridoma celltechnique．The characterization of antibodyweredeterminedbyELISA．ResultsNinemonoclonalantibodiesagainstMbwereprepared．Thetiters ofasciteswere1：5×10 ～1：2×10 ．Fivemonoclonalantibodiessuccessfullyfomr edsixanatibodypairs．The affinityconstantsoffivemonoclonalantibodieswereintherangeof6．46×10。to3 ． 68x10 L／mo1．Thecross— reactionratioswithHB andALBwere7．434 ×10一％ ～2．904 ×10一％ and4．980 ×10’％ ～3． 830 ×10一％ respectively．Twomonoclonalantibodies(Mb17B6andMb21E8)wereusedtodevelopthechemiluminescence immunoassay．Theassaysensitivitywas6．02ng／mL．Conclusion ThemonoclonalantibodiesagainstMb are prepa