应用RNA干扰技术阻断PRRSV感染地研究.pdfVIP

猪传染病 产生较晚原囚的机制可能是，在病毒感染前几周，机体产生抗主要中和抗原GP5的抗体是针对具有免疫优 势和非中和性的A抗原决定基，而B细胞对有中和活性的B抗原决定基的识别则被A抗原决定基所封阻 114】；细胞免疫类似于中和抗体的产生，感染后4周T淋巴细胞才出现增殖反应、分泌免疫干扰素，这种反 应可持续9．14周1”】。由于在病毒感染后前几周出现免疫应答空白，导致PRRSV在宿主细胞内大量复制， 发生病毒血症，引起排毒和传染。但特异性中和抗体和细胞免疫应答在抗PRRSV感染中起着重要作用， 病毒最终从感染猪体内被清除。本试验结果表明，在PRRSV感染早期注射高滴度特异性免疫血清，能完 全终止病毒复制。原因是，PRRSV通过口和鼻腔等粘膜途径和呼吸途径进入肺泡巨噬细胞复制，后经血 液循环，形成病毒血症，而高滴度中和抗体渗透到肺泡或表面阻止病毒在肺泡巨噬细胞之间转移，在细胞 免疫的协同作用下，将病毒从体内清刚16】。所以，在兽医临床上，猪感染PRRSV后，要迅速控制该病， 可用高免血清进行紧急被动免疫，这是一种行之有效的措施。另外，本试验还证实，猪感染PRRSV后， 用PRRS灭活苗免疫治疗，也能减轻病毒血症。 参考文献略 应用RNA干扰技术阻断PRRSV感染的研究 贺云霞华荣虹周艳君仇华吉童光志’ (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江，哈尔滨150001) RNA干扰(RNA stranded RNA，dsRNA)的一种生物反应(1)，被证明是正常生物体内抑制特定基因表达的一种保守的防御机制， 的现象，这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默(post．transcriptionalgenesilencing，PTGS)。 许多研究者已经利用这种机制来调节蛋白编码基因的表达并获得成功(3)。短DNA发夹结构转录后 与靶基因结合，在相关酶的作用下导致靶基因的降解。在本研究中，我们针对猪繁殖与呼吸综合症病毒 pEN／U6-N218、pEN／U6．N294和pEN／U6．GFP转染Marc．145后，用PRRSVCH．1a攻毒，结果证明pEC以 照组底3-4个数量级。免疫荧光和定量PCR结果同样表明，干扰效果显著。 同事用化学合成的siRNA导入哺乳动物细胞。他们用荧光素酶siRNA和含荧光素酶报告基因的载体共转 254 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 在几个哺乳动物细胞系中都没有产生非特异性效果，这一发现使得这一技术广泛应用于基因功能研究，包 PollII启动子表达短RNA的质粒表 括靶向临床疾病相关基因，意味着RNAi在治疗上的潜在应用。RAN 达系统及病毒表达系统，同样可有效抑制特异基因表达沉默并且不引起明显的干扰素反应，使RNAi技术 应用于多种病毒性疾病的治疗研究中，在HIV、HBV、SARS及其它许多病毒性疾病中均取得了可喜的实 验结果，本研究把该技术应用于PRRSV病毒的研究，为探索PRRSV的致病机制和基因功能提供了新手段。 参考文献略 PRRSV感染Marc一145细胞的 病毒形态发生学、细胞超微结构变化及细胞凋亡的研究 刘伍梅1·2汪铭书1·2※程安春1·2 2．动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川， (1．四川农业大学动物科技学院四川，雅安，625014； 雅安，625014) 过透射电镜、光镜、DNA 微结构变化及感染细胞凋亡的动态变化规律进行研究。观察结果显示，病毒粒子呈球形，有囊膜，大小约 45—65nm，内含直径大小约25—30啪的核衣壳。病毒感染细胞后以细胞内吞方式进入细胞，在胞浆内复 制，装配好的病毒以出芽或细胞外分泌释放到细胞外。感染细胞超微结构变化主要表现为：细胞胞浆空泡 增多，内质网扩张，线粒体的嵴肿胀、脱落，最后空泡化，细胞表面的微绒毛脱落，出现典型的细胞凋亡 特征，并观察到凋亡小体，最后整个细胞裂解，破碎。DNA 感染组凋亡细胞与对照