中国美利奴羊发情期与乏情期卵巢组织差异表达基因研究.pdfVIP

中国美利奴羊发情期和乏情期卵巢组织差异表达基因研究 林杉，陈磊，张文祥，赵宗胜’，田占伟 新疆石河子大学动物科技学院，新疆石河子，832003 关键词：绵羊；抑制性消减杂交(SSH)分析；繁殖性状 引言 母羊繁殖力低是制约绵羊产业可持续性发展的重要因素。本研究选用的中国美利奴羊是我国培育的优 良细毛羊品种之一，具有典型的一年一次、单胎繁殖特性。利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建中国美 利奴羊卵巢组织消减cDNA文库，并对文库中筛选到的差异表达基因进行分析，对阐述卵巢周期性应答，研 究绵羊繁殖规律，进而在生产实践中提高母羊繁殖力具有重要意义。 材料与方法 中国美利奴羊由石河子大学动物科技学院动物实验站饲养。在相同的饲养条件下，通过每天早、晚 2次的公羊试情，从母羊群中挑选出3只发情期(11月份)和3只乏情期(3-4月份)的中国美利奴羊，屠宰 PCR．SelectcDNASubtract cDNA文库。对筛选到的差异表达基因，进行实时定量PCR分析。 结果 从文库中分别随机挑取了386个阳性克隆进行测序，测序后分别成功得到了306个有效的克隆序列信 息，经过BLAST在线分析序列同源性，以匹配区域长度大于100bp，同源性大于80％为标准，从中分别获 得了126个非冗余的基因序列信息，其中105个序列是已经同源序列，21个序列为未知新序列。菌落PCR电 泳检测表明插入cDNA片段的大小均在150．800bp之间。文库差异表达基因功能的GeneOntology分析表明， 这些基因广泛参与了代谢、细胞增殖、细胞周期、信号转导、细胞结构组成等与绵羊发情密切相关的生物 学过程。为了更加准确地鉴定构建文库中差异基因表达的可靠性，从105个己比对同源的基因序列中选取 与绵羊发情周期密切相关的四个基因视黄酸受体应答l(Rarresl)、胸腺素B4(Tmsb4x)、翻译延长因子 1．43倍，均呈现不同程度的上调表达。 图1 6个文库基因实时定量PCR分析卜发情期，2一乏情期 l Real—time PCRResultsofselected6 in Fig quantitative genes Subtraction library 讨论与结论 本研究构建发情期和乏情期中国美利奴羊卵 IL|；■·孽L 巢组织正向消减cDNA文库，发现Rarresl、 与中国美利奴羊季节性发情调控紧密相连。 Rarresl是从皮肤组织中被发现的一种新的视黄酸 受体(RARIB／7)调节基因，具有调节细胞的生长 l恼憎i{L|i“一 分化、增殖和凋亡等重要生物学作用，研究结果 表明，中国美利奴羊卵巢组织中Rarresl的表达量 发情期显著高于乏情期，Rarresl很可能参与调节 卵巢卵泡的周期性变化。Ford等研究发现Tmsb4x在猪的发情周期发生显著的变化，能够通过改变卵巢激素 的分泌水平从而影响下丘脑．垂体．卵巢轴的活性。Eeflal的磷酸化在蛋白的合成和细胞的增殖方面具有重 粒细胞中表达量上调，本试验结果与之相一致。Ptma作为核蛋白成员，广泛分布于哺乳动物组织中并且在 期，试验结果表明Ptma在中国美利奴羊卵巢组织中发情期上调表达，据此推断，Ptma很可能由多个信号通 路参