葡萄酒乳酸菌分子鉴定研究进展.pdfVIP

第5＆6期 河北林业科技 2014年10月 葡萄酒乳酸茵分子鉴定研究进展 李凯，田淑芬 (天津市农科院葡萄研究中心，天津300192) 摘要：该文介绍了16srDNA／rRNA序列分析、16s～23srRNA基因问隔区(Intergenic spacerRe舀on，IsR)序列分析及 用进展进行综述。 关键词：葡萄酒；乳酸菌；酒酒球菌；分子鉴定 中图分类号：s609．2 文献标识码：A 文章编号：1002—3356(2014)05＆06_0109一06 苹果酸一乳酸发酵(malolacticfe瑚entation，ment Le蟛hPolymorphism，RFLP)等[4]。 简称MLF)是葡萄酒酿造中非常重要的二次发酵1 16SrDN船RNA序列分析 过程。研究发现，只有部分乳酸菌(LAB)可进行苹 16s 果酸一乳酸发酵。它们分属于酒球菌属(De加coc— rDNA／rRNA序列同源性分析是指用特 c淞)、明串珠菌属(kMco脚幻c)、乳杆菌属(三∞一定引物对供试菌株保守序列16srDNA／rRNA进 行特异扩增，并对扩增产物测序，测序结果与 z06邙cⅢ郴)和片球菌属(Pediococc吣)『l】。国内外研 究表明，能够适应葡萄酒环境、较专一地进行苹 果酸一乳酸发酵并对酒质有增益作用的乳酸菌主 对目的菌株的鉴定。DUPLESSIs等综合运用 16srRNA 要是酒酒球菌嘲，因此乳酸菌种类鉴定对于优良 J芋列分析和种内特异性引物PcR来鉴 发酵特性菌株的筛选具有非常重要的意义。 定葡萄汁和白兰地生产过程中分离出的54个菌 乳酸菌分类鉴定方法可分为传统方法和分子 株，其中大多数是酒酒球菌(22株)，但也分离出 生物学方法。传统分类鉴定方法主要是借助菌株 少量短乳杆菌(8株)、益生菌(8株)和植物乳杆 间的表型性状，但常烦琐而耗时，且鉴定结果不够 菌(6株)翻。Koh等(2004)通过局部16SrDNA排 准确。分子生物学的快速发展及其在细菌分类鉴 序和系统进化分析来进行菌类鉴定，系统进化分 定中的应用，是细菌的分类鉴定与菌株区分方法 析中，戊糖乳杆菌和植物乳杆菌16SrDNA有 的一次革命嘲。科学家开始从分子和基因水平认识 乳酸菌的遗传结构、组成和分类，同时许多新的分 变性梯度凝胶电泳(DGGE)来分析16SrRNA基 rDNA 子标记被用于乳酸菌的分类和鉴定，如16s 因，他们发现龙舌兰酒中的乳酸菌群落主要由小 序列分析、16s～23SrRNA基因间隔区(IIltergenic片球菌、短乳杆菌、类布氏乳杆菌和植物乳杆菌 组成，另外还在残汁中发现了魏斯氏菌属和芽孢 spacerRe西on，IsR)序列分析和基于PcR技术的 分子标记技术等，其中基于PCR技术的分子标记 杆菌属这些非典型的属用。16srDNA／rRNA序列 又可分为扩增rDNA限制性酶切片段分析(Am—保守且鉴定结果的可靠，是目前细菌分类和鉴定 RibosomalDNARestriction 经常使用的一种检测方法，但该方法通常进行乳 plified Analysis， ARDRA)、随机扩增多态性DNA(RalldornlyAmpli一酸菌菌种