BVDV-2+E2蛋白基因的克隆与原核表达研究.pdfVIP

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2017-08-19 发布于安徽
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BVDV-2+E2蛋白基因的克隆与原核表达研究.pdf

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BVDV一2 E2蛋白基因的克隆及原核表达研究刘昱成1，王国超1，孟庆玲1’2，乔军“+，才学鹏2，贺志吴1，杨海波1，陈创夫1 1．石河子大学动物遗传改良与疾病控制新疆自治区重点实验室，新疆石河子832003 2．中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州730046 引言 BVD／MD是由牛病毒性腹泻病毒BVDV感染牛引起的以发热、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的一种传染病。BVDV感染母畜后造成持续性感染，持续感染病畜常年带毒、排毒，是畜群中主要的传染源。BVDV还是牛源生物制品的潜在污染源，给畜牧业生产造成巨大的经济损失。根据BVDV基因组分子流行病学调查发现两个基因型在我国很多地区同时流行，给BVDV的诊断和防控带来很大的困难，因此对BVDV-2型商品化的诊断试剂的研发就显得尤为重要。方法为了研发BVDV-2型商品化的诊断试剂，本研究根据GenBank登录的BVDV-2E2基因序列，设计特异 a．E2，并转化入大肠埃希氏菌BL21(DE3)中。通过卡纳表达载体pET-28a中，构建重组表达载体pET-28 a．E2。霉素筛选重组菌pET-28 结果 a．E2相对分子质量重组菌经IPTG诱导，SDS．PAGE分析表明，目的蛋白成功表达，重组蛋EIpET-28 约为32 blot ku，与理论分析值相符合。重组菌表达产物通过SDS．PAGE，又与一抗二抗反应进行Western 组E2蛋白具有良好的反应原性。讨论本研究对BVDV-2 E2基因编码蛋白的抗原表位进行了预测分析，克隆出了BVDV-2E2区中抗原表位较集中的一段长达600bp的片段区域在大肠杆菌中进行了表达，获得具有较强反应原性的重组E2蛋白，为研发BVDV-2诊断试剂奠定了良好的基础。 27