腹毛目纤毛虫皮层微管类细胞骨架及微管蛋白的的研究.pdfVIP

中文摘要 腹毛目纤毛虫皮层微管类细胞骨架及微管蛋白的研究 专 业： 动物学 研究方向： 细胞及分子生物学 博士生： 曾 红 导 师： 顾福康教授 中文摘要 关于真核生物细胞骨架的研究是细胞生物学的～个重要发展领域。由于原生 动物纤毛虫具有多种复杂的细胞骨架结构，加之其材料培养和处理的优点，一直 被作为研究细胞骨架结构与功能及其细胞调控的理想材料。20世纪80年代初， 许多学者应用蛋白银染色方法和超微结构方法，显示了纤毛虫细胞皮层中以纤毛 基体作为主成分的骨架结构，探讨了纤毛虫皮层纤毛器的形态、形态发生及其结 构形成机理，在国内外原生动物细胞学领域成为主流。20世纪90年代起，先后 应用非离子去垢剂处理和扫描电镜相结合的方法、稳定保存微管结构的透射电镜 术，微管蛋白的抗体标记及其免疫荧光技术及相关的生化与分子生物学等方法显 示纤毛虫的微管胞器及其微管蛋白组分，探索微管胞器的形态、功能及其微管装 配机理，积累了较多的资料，取得了重要的进展。但是，目前仅对草履虫、四膜 虫中分散排布的体纤毛基体的装配有较深入的了解，而对不同种纤毛虫的毛基体 特别是紧密聚集排列的纤毛器基体微管的装配和基体微管装配在细胞内的启动 和发生过程尚未进行深入的研究。鉴于这种情况，本文采用细胞微管结构分化更 为复杂，细胞皮层纤毛器形成紧密聚集排列的腹毛目纤毛虫为对象，应用其皮层 纤毛器分化具有典型特征的三种纤毛虫，即游仆虫(Euplotessp．)、贻贝赫尾虫 sp．)为材料，应用特异性显 (Stytonychiamytilus)和伪尾柱虫(Pseudourostyla 示微管及微管蛋白的FLUTAX直接荧光标记法和抗a、抗Y微管蛋白免疫荧光 标记法，以及扫描电镜术(SEM)，研究了其皮层微管类细胞骨架的组成和发生； 此外，对扩增出的游仆虫、伪尾柱虫编码y微管蛋白的基因片段进行了序列测定 和分析，并采用RNAi喂食法使游仆虫Y微管蛋白基因沉默，初步探讨了Y微管 蛋白编码基因的功能。结果如下： l纤毛虫皮层纤毛器微管骨架 腹毛目纤毛虫皮层纤毛器微管骨架由口围带、波动膜、额腹横棘毛、背纤毛 等纤毛器微管和纤毛器基部附属微管组成。三种纤毛虫皮层纤毛器微管骨架的分 中文摘要 布模式各不相同，且相应的纤毛器微管骨架及其纤毛器基部附属微管也依据特定 模式在皮层中定位，其中： (1)游仆虫：具有“巨大型口围带一额腹棘毛一横棘毛一尾棘毛”模式。 细胞腹面口围带为巨大形，额腹棘毛汇聚在口围带右侧，横棘毛位于口围带基部 右侧，尾棘毛定位于细胞后端。与额腹棘毛基部相联系的前纵微管束、后纵微管 束和放射微管束在皮层中伸展，前纵微管束和后纵微管束分别由棘毛基部的左前 角、右后角向皮层前后伸展，几根放射微管柬向细胞质的不同方向伸展：每根横 棘毛基部各发出的一束前纵微管束，向前方伸展并汇集在细胞的前端。 (2)棘尾虫：具有“口围带一额棘毛一腹棘毛一横棘毛一左、右缘棘毛” 模式。细胞腹面口围带中等大小，额棘毛位于口围带右侧，腹棘毛位于腹面中区， 横棘毛位于腹面后区，左、右缘棘毛定位于细胞左、右侧。额、腹棘毛基部分别 向周围皮层发出前纵微管束、后纵微管束和周围微管束；每根横棘毛基部的前纵 微管束在其前方汇集：左、右缘棘毛的基部发出横微管束、前纵微管束和后纵微 管束，其中左缘棘毛基部横微管束自棘毛基部向右伸展在皮层内；右缘棘毛基部 横微管束自棘毛基部向左侧皮层伸展。 (3)伪尾柱虫：具有“口围带一额棘毛一腹棘毛一横棘毛一左、右缘棘毛” 模式。细胞腹面口围带为小的倒“u”形，额棘毛形成列，2列腹棘毛位于细胞 中腹区，多列左、右缘棘毛位于细胞左右两侧。额棘毛的基部发出的前纵微管束 和后纵微管束和周围微管伸展在皮层内；中腹棘毛基部发出前纵微管柬、后纵微 管柬和横微管束；横棘毛基部向左前方发出的前纵微管束在前方汇聚；左、右缘 棘毛列的基部附属微管的按序排列，每个缘棘毛基部分别向左前方、右后方发出 前