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中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本入在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 亲文作者签名：碰日期： ，《?譬．矿 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期问论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 计醺 指导教师签名： —游 (：：亟囊叵二) 脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A基因的克隆和表达 雕 置 脑膜炎奈瑟氏菌是引起人流行性脑膜脑炎(以下简称流脑)的致病菌。 在非流行期，发病率在1—3／10万左右，而在流行期，发病可高达500／10 万，对6个月到2岁的婴幼儿及青少年危害极大，病死率高达10％以上，近 年来，我国流脑发病率有明显上升趋势，暴发流行时有发生，对我国人民的 生命健康构成极大威胁。 脑膜炎奈瑟氏菌根据菌体表面的荚膜多糖分为12个血清群。全世界 大约90％的病人是由A群、B群和c群引起的。以A群、C群荚膜多糖为 基础的疫苗被开发出来并被证明对控制流脑的暴发和流行有效。但是A 群、c群疫苗对幼儿缺乏免疫原性，而且它们提供的保护期相对短，一般为 1—3年。B群荚膜多糖由于无法诱导人体产生免疫反应，所以B群流脑疫 苗一直也没有被开发出来。基于这些原因，开发非荚膜多糖的表瓦蛋白抗 原疫苗以刺激机体产生保护性、持久性抗体就成为另一种选择。 但是每个血清群的脑膜炎奈瑟氏菌根据菌体主要表面蛋白(OMP)又 可分为多个血清型、血清亚型，如B群有20多个血清型，每个血清型又有至 少10多个血清亚型，依此类推12个血清群的脑膜炎奈瑟氏菌有上千种表 面蛋白。寻找所有血清群共有的表面蛋白抗原成为几十年来全世界脑膜炎 奈瑟氏菌研究者奋斗的目标，1997年Matin等发现了一种极为保守的表面 蛋白，存在于所有的脑膜炎奈瑟氏菌菌体表面，命名为脑膜炎奈瑟氏菌表面 pA的功能至今还不清楚，但给小鼠注射纯化的或重组的NspA后都能诱导 产生保护性抗体，抵抗脑膜炎奈瑟氏菌的攻击。 综上所述，NspA对流脑的诊断和预防策略的制定具有极大的应用价 值。为此，本研究对脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A基因进行了克隆和表达， 并采用ELISA对纯化的NspA融合蛋白进行了活性检测，同时验证了人体 ·1-