生物化学 教学课件 作者 常桂英刘飞 主编 第五章 酶与维生素.ppt

尚辅网 尚辅网 四、酶活力的测定 三、同工酶 （一）变构酶 变构效应剂 (allosteric effector) 3.变构酶的特点 ①?通常具有四级结构，存在协同效应； ② 含有催化亚基和调节亚基（或催化部位和调节部位）。 ③ [S]-v关系曲线为S形。 （二） 酶的共价修饰调节 1.共价修饰(covalent modification)调节:在其他酶的 催化下，酶蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基团发 生可逆的共价结合，从而改变酶的活性，此过程称为 共价修饰调节。 　 3.共价修饰调节的特点 ①受共价修饰的酶存在有 （高）活性和无（低）活性 两种形式； ②具有瀑布效应（级联效应）； ③是体内经济、有效的快速调节 方式。 第五节 酶促反应动力学 酶促反应动力学 研究各种因素对酶促反应速度的影响。 影响因素包括有 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。 单底物、单产物反应 酶促反应速度用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示 反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度 底物浓度远远大于酶浓度 一、底物浓度对反应速度的影响 米氏方程的推导 (2) Km的意义 Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 ② 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可表示酶对底物的亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 (3) Vmax的意义 定义：Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成 正比。 3.米氏常数Km的测定 二、酶浓度对反应速度的影响 当[S]＞＞[E]，反应速度与酶浓度成正比。 三、温度对反应速度的影响 双重影响: 五、激活剂对反应速度的影响 激活剂(activator) 　　使酶由无活性变为有活性或使酶活性增加的物质。 ? 必需激活剂 (essential activator) ? 非必需激活剂 (non-essential activator) 六、抑制剂对反应速度的影响 酶的抑制剂(inhibitor) 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质统称为酶的抑制剂。 (一) 不可逆性抑制作用 * 概念 抑制剂通常以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活，不能用透析、超滤等方法予以除去。 * 举例 有机磷化合物 ?? 羟基酶 解毒 -- -- -- 解磷定(PAM) 重金属离子及砷化合物 ?? 巯基酶 解毒 -- -- -- 二巯基丙醇(BAL) 　 　 （二） 可逆性抑制作用 * 概念 抑制剂以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或丧失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。 1. 竞争性抑制作用 定义 抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。 2. 非竞争性抑制 　　抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系。　 反竞争性抑制 尚辅网 (1) 什么是米氏方程式？ 1913年Michaelis和Menten在快速平衡理论的基础上提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)，1925年Briggs和Haldane在稳态平衡理论的基础上并对米化方程进行了修正，但为纪念仍称米氏方程 [S]：底物浓度 V ：反应速度 Vmax：最大反应速度 Ｋm：米氏常数 尚辅网 令： 将（4）代入（3），则： [ES]生成速度： ，[ES]分解速度： 即： 则： (1) 经整理得： 由于酶促反应速度由[ES]决定，即 ，所以 (2) 将（2）代入（1）得： (3) 当酶反应体系处于稳态时： 当[Et]=[ES]时， (4) 所以 尚辅网 当反应速度为最大反应速度一半时 Km值的推导 Km＝[S] * Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 尚辅网 尚辅网 意义：Vmax=K3 [E] 如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算的转换数，即动力学常数K3。即单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。 尚辅网 Lineweaver–Burk的作图法 — 双倒数作图法。 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax 取米氏方程式的倒数形式： 1/Vmax 斜率=Km/Vmax -1/Km 尚辅网 0 V [E] 关