生物分离与纯化技术 教学课件 作者 邱玉华 主编 第二章.ppt

尚辅网 尚辅网 第2章 预处理技术 第1节 概述 一、预处理 二、生物材料的预处理过程 一、预处理 通常，生物物质的分离纯化是以含生物物质的溶液为出发点，进行一系列的提取和精制操作。因此，生物物质分离纯化的第一个必需步骤就是从生物材料出发，设法使所制备的目标产物转移到溶液中，同时去除其他悬浮颗粒（如培养基残渣、菌体、细胞或絮凝体等）以及改善溶液的性状，以利后续各步操作，该过程通常称预处理。 二、生物材料的预处理过程 1．动物组织和器官要先除去结缔组织、脂肪等非活性部分，然后绞碎，选择适当的溶剂形成细胞悬液 2．植物组织和器官要先去壳、除脂，再粉碎，选择适当的溶剂形成细胞悬液。 3．发酵液、细胞培养液、组织分泌液以及制成的细胞悬液等则根据目标产物所处位置不同进行相应的处理。 第2节 发酵液过滤特性的改变与相对纯化 学习目标 1．熟悉发酵液过滤特性的改变方法 2．掌握发酵液的相对纯化方法 第2节 发酵液过滤特性的改变与相对纯化 一、发酵液过滤特性的改变 二、发酵液的相对纯化 一、发酵液过滤特性的改变 1．降低液体黏度 2．调整PH 3．加入反应剂 4．加入助滤剂 1．降低液体黏度 根据流体力学原理，滤液通过滤饼的速率与液体的粘度成反比，可见降低液体粘度可有效提高过滤速率。降低液体粘度的常用方法有加水稀释法和加热法等。采用加水稀释法虽能降低液体粘度，但会增加悬浮液的体积，加大后继过程的处理任务。而且，单从过滤操作看，稀释后过滤速率提高的百分比必须大于加水比才能认为有效，即若加水一倍，则稀释后液体的粘度必须下降50%以上才能有效提高过滤速率。 2．调整PH pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善其过滤特性。此法是发酵工业中发酵液预处理较常用的方法之一。对于氨基酸、蛋白质等两性物质，在酸性条件下带正电荷，在碱性条件下带负电荷，而在某一pH值下，净电荷为零，称为等电点。在等电点下，两性物质的溶解度最小，此即为等电点沉淀法。如味精生产中，利用等电点（pH3.22）沉淀法提取谷氨酸。对于蛋白质，由于羧基的电离度比氨基大，故蛋白质的酸性性质通常强于碱性，因而大多数蛋白质的等电点都在酸性范围内（pH4.0-5.5）。 2．调整PH 利用酸性来调节发酵液pH值使之达到等电点，可除去蛋白质等酸性两性物质。在膜液过滤中，发酵液中的大分子物质易与膜发生吸附，通过调整pH值改变易吸附分子的电荷性质，即可减少堵塞和污染。此外，细胞、细胞碎片及某些胶体物质等在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒，有利于过滤的进行。 3．加入反应剂 加入反应剂和某此可溶性盐类发生反应生成不溶性沉淀，如CaSO4、AlPO4等。生成的沉淀能防止菌丝体粘结，使菌丝具有块状结构，沉淀本身可作为助滤剂，并且能使胶状物和悬浮物凝固，从而改善过滤性能。如在新生霉素发酵液中加入氯化钙和磷酸钠，生成的磷酸钙沉淀可充当助滤剂，另一方面可使某些蛋白质凝固。又如环丝氨酸发酵液用氧化钙和磷酸处理，生成磷酸钙沉淀，能使悬浮物凝固，多余的磷酸根离子还能除去钙、镁离子，并且在发酵液中不会引入其他阳离子，以免影响环丝氨酸的离子交换吸附。正确选择反应剂和反应条件，能使过滤速率提高3-10倍。 4．加入助滤剂 助滤剂是一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。这是因为充当过滤介质的助滤剂表面具有吸附胶体的能力，并且由此助滤剂颗粒形成的滤饼具有格子型结构，不可压缩，滤孔不会被全部堵塞，可以保持良好的渗透性，既能使悬浮液中细小颗粒状胶态物质截留在格子骨架上，又能使清液有流畅的通道。所以使用惰性助滤剂能大大提高过滤能力和生产效率，改善滤液澄清度，降低过滤成本。常用的助滤剂有硅藻土、纤维素、石棉粉、珍珠岩、白土、炭粒、淀粉等，其中最常用的是硅藻土。 4．加入助滤剂 助滤剂的使用方法有两种：一种是在过滤介质表面预涂助滤剂，另一种是直接加入发酵液，也可两种方法同时兼用。采用第一种方法，在一个旋转真空过滤机的转鼓上，预涂上助滤剂，就可以对非常细小或可压缩的低固含量（≤5%）悬浮液进行过滤。在改进的旋转真空过滤机上，采用一把缓慢向鼓面移动的刮刀，在操作时，将滤饼连同一层助滤剂一起刮去，使过滤表面不断更新，以维持正常的过滤速度，直到助滤剂被全部移走后，再重新涂层。采用第二种方法，则多数是助滤剂与压滤机结合起来使用，对于菌体较细小、黏度较大的发酵液，可加放助滤剂后进行压滤，或者先将含助滤剂的悬浮液通过压滤机，形成过滤介质，然后对混有且滤剂的料液进行过滤，这样可提高滤饼的渗透性。对于后一种方法，使用时要有一个带搅拌器的混合槽，充分搅拌混合均匀，防止分层沉淀。 二、发酵液的相对纯化 1、高价无机离子的去除 2．杂蛋白质的去除 1、高价无机离子的去除 发酵液中主要