生物化学基础 教学课件 作者 靳利娥刘玉香秦海峰谢鲜梅 等编 第4章 核酸.ppt

尚辅网 尚辅网 尚辅网 一、核酸的酸碱性质 碱基、核苷与核苷酸均能发生两性解离 DNA等电点4-4.5、RNA等电点 2-2.5 二、核酸的紫外吸收 核酸在平均260nm紫外波段有强烈的光吸收 纯DNA：A260/A280 = 1.8（1.65-1.85） 纯RNA：A260/A280 = 2.0 第五节 核酸理化性质 尚辅网 DNA的紫外吸收光谱 天然DNA 变性DNA 核苷酸总吸收值 220 240 260 280 0.1 0.2 0.3 0.4 波长（nm） 光吸收 1 2 3 尚辅网 核酸的变性、复性和杂交 变性定义：在物理、化学因素影响下， DNA碱基对间的氢键断裂，双螺旋解开，伴有A260增加（增色效应），DNA的功能丧失。 变性因素：加热、极端PH值、化学因素尿素等 DNA变性过程 尚辅网 核酸的变性、复性和杂交 熔解温度（Tm）：DNA双螺旋结构失去一半时对应的温度。DNA的Tm一般在82－95℃之间。 复性：在一定条件下，变性DNA 单链间碱基重新配对恢复双螺旋结构， 伴有A260减小（减色效应） DNA的功能恢复。 尚辅网 定义：变性的DNA溶液中加入外源DNA单链分子或RNA单链分子（与原DNA具有同源性），去除变性条件后复性形成双螺旋结构的过程。 核酸的变性、复性和杂交 分子杂交的种类 Southern Blot：DNA-DNA杂交 Northern Blot：DNA-RNA杂交 Western Blot：抗原-抗体进行杂交 原位杂交：活体组织上进行杂交 尚辅网 复习与作业 1、某DNA样品含腺嘌呤15.1%（按摩尔碱基计），计算其余碱基百分含量。 2、DNA双螺旋结构由谁提出？DNA双螺旋结构基本特点是什么？这些特点能解释哪些最重要的生命现象？ 4、tRNA的结构有何特点？有何功能？ 5、DNA和RNA的结构有何异同？ 名词解释 变性和复姓　　分子杂交 增色效应和减色效应 回文结构　Tm　　 cAMP Chargaff定律 * * * * 尚辅网 DNA的双螺旋结构的形成 T-A碱基对 C-G碱基对 尚辅网 DNA的双螺旋模型特点 两条、反向、平行、互补多聚核苷酸链右旋相互盘绕而形成。 磷酸和脱氧核糖不断重复位于外侧，可变碱基位于内侧，链间碱基按A—T，G—C配对氢键结合。 螺旋直径2nm，相邻碱基平面垂直距离0.34nm，螺旋结构每隔10个碱基对重复一次，间隔3.4nm。 碱基平面与纵轴垂直，糖环平面与轴平行 尚辅网 DNA的双螺旋模型特点二 螺旋之间依靠以下因素保持稳定： 碱基之间氢键； 碱基平面堆积力； 碱基处于相对疏水环境； 磷酸基团上负电荷被胞内正离子中和 6. 大沟：宽1.2 nm，深0.85nm 小沟：宽0.6nm，深0.75nm 尚辅网 DNA双螺旋结构的理论意义 解释特定生命现象； DNA复制的基础； 遗传与变异的依据； 生物性状控制的基地； 为现代分子生物学基因工程奠定了理论基础。 尚辅网 DNA双螺旋的多样性—不同构象 尚辅网 A、B、Z-DNA三种双螺旋的比较 A-DNA Z-DNA B-DNA A B Z 外型 粗短 适中 细长 螺旋方向 右 右 左 螺旋直径 2.55nm 2.37nm 1.84nm 碱基直升 0.23nm 0.34nm 0.38nm 碱基夹角 32.7o 34.6 o 60.0 o 每圈碱基数 11 10.4 12 碱基倾角 19 o 1 o 9 o 糖苷键构象 反式 反式 C、T反式 G顺式 尚辅网 回文序列 定义：单条核酸序列内以对称点为中心，两侧碱基互补的序列区域。含