广防己在大鼠体内的毒代动力学及组织分布研究.pdfVIP

获得鉴定(Figure i)。为进一步验证其酶活性，我们专门合成了Lp—PLA2的抑制剂 SB435495，使用该抑制剂检测其抑制曲线(Figure4)，结果显示其抑制曲线与文献报道的人 血浆中纯化的Lp—PLA2一致。 3讨论 本文报道了从分化的单核白血病细胞系T肿一1细胞中首次成功克隆出Lp-PLA2的全长基因。作为 一个药物发现靶点，我们表达和纯化了该酶蛋白。本文描述了怎样利用新近发展的基因克隆表达技术， 通过昆虫杆状病毒表达系统成功克隆和表达全长的人Lp—PLA2基因。我们在此报道的方法策略也为其 他酶基因的克隆和表达提供一个良好的蛋白表达方法模式。重组的Lp—PLA2是以6×His融合蛋白的 方式表达，WesternBlot和酶活性实验都证明了该融合蛋白的正确表达并具有很好的酶活性。通过 抑制剂的研究和发现，将为动脉粥样硬化的治疗提供新的途径。 广防己在大鼠体内的毒代动力学及组织分布研究 刘莎 杜贵友 赵雍 (中国中医研究院中药研究所，北京100700) AI的浓度。结果：经拟合从一I代谢特征符合血管外给药二室模型，大、中剂量组主要毒代动力学参 数如下：t。／2d分别为1．025h、0．45h，t-／2 AA—I及AI在体内广泛分布并蓄积，且主要通过粪便排泄。结论：广防己(从一I)提取物在大鼠体内 的代谢属非线性动力学。AA—I及AI在大鼠体内多个组织中特异性分布并蓄积。 [关键词] 广防己马兜铃酸一I马兜铃内酰胺毒代动力学 近年来有关过量服用含广防己的中药导致急性肾损伤的病例被屡屡报道，实验研究证明广防己中 acid，AA—I)是导致肾脏损害的主要原因。本实验建立了同时测 所含的马兜铃酸一I(aristolochic 从一I在大鼠体内的毒代动力学、排泄及组织分布研究，为AA—I导致肾脏损害的机理研究提供物质 基础方面的证明。 1材料与方法 1．1药品与仪器 马兜铃酸一I对照品(中国药品生物制品检定所，纯度≥95％)：马兜铃内酰胺对照品(北京大学 80．2％，本所化学室提供)混悬于0．2％乙 医学部，纯度／98％)；广防己提取物(含马兜铃酸一I 酸溶液“1中；甲醇、乙腈为色谱纯；乙酸为分析纯。 惠普1i00型全自动进样高效液相色谱仪。 I．2动物 -437- Wistar大鼠，6，二级，体重251±209，北京通利养殖场提供。 1．3实验方法 1．2．1毒代动力学 48，72h眼眶采血0．5ml，3000r·min。离心lOmin，分离血浆。 11、11～13、13～24h接取胆汁。 学”。代谢笼收集给药后第1、2、3天的尿液及粪便。给药后第4、8天各组分别处死5只大鼠，取心、 肝、脾、肺、右肾、脑、胃、睾丸傲组织分布。 1．4样品测定 用本室建立的方法分别测定各组大鼠血浆、胆汁、尿、粪及组织中的从一I及AI的浓度，样品处 理方法及色谱条件见表1。 表1大鼠血、排泄物及组织中马兜铃酸一I及马兜铃内酰胺的测定方法 Tab1肝Lcmethodforthedetermination of从一IandAIin and plasma、excrementesorgans 1．5数据处理 计量资料以均数±标准差表示。用中国药学会编制的3p97程序对每个剂量组的药。时数据进行 毒代动力学参数的计算，并拟合房室模型。 2结果 2．1方法学 2．1．1专属性在本实验条件下，AA—I与AI达到基线分离，峰形尖锐，样品中内源性物质不干扰待 测物的测定。AI保留时间为13．90rain，AA—I保留时间为14．85min，(图1、2)。 -．438．． 图1AA—I及AI对照品 图2药后胆汁样品色谱图