东方田鼠自发上皮性卵巢癌的病理学研究.pdfVIP

第六届中南地区实验动物科技交流会 论文汇编 东方田鼠自发上皮性卵巢癌的病理学研究 俞远京，苏志杰，周智君，马亚东 (中南大学湘雅医学院实验动物学部，长沙410078) 【摘要】目的弄清东方田鼠自发性卵巢土皮癌的病理特点和组织学分类，了解 东方田鼠卵巢癌的细胞生物学变化以度癌细胞中相关基因的表达规律。方法在已建 立的东方田鼠封闭群中收集患有自发性卵巢癌的病鼠．观察其发病的，临床特征，采用 大体病理解剖和病理组织学方法，对其进行病理学分类，通过透射电镜和扫描电镜，观 察癌细胞的超微结构和细胞表面改变，并用常规的SP免疫组化法检测P53，HSP27， HSP70和HSP90表达情况。结果东方田鼠自发性卵巢癌以腹水和恶病质作为其主要 细胞中的表达阳性率分剐为：37．5％，100％，100％和62．5％。结论东方田鼠自发上皮性 卵巢癌与人类的相应肿瘤极为相似，可以作为一种板有价值的卵巢癌动物模型。 【关键词】东方田鼠；卵巢癌；病理学；电镜；免疫组化 卵巢癌尤其是上皮性卵巢癌是妇科的一种重要肿瘤性疾病，由于其症状无特异性，因此卵巢癌 的早期诊断较为困难，卵巢癌一旦扩散，其5年生存率仅为29％。尽管对许多肿瘤的基础研究有了很大 的进展，但对妇科致死率极高的卵巢上皮癌的病因和分子过程还了解甚少，其主要原因是缺乏用于 这类研究的动物模型。【14 在对东方田鼠进行的研究中，发现东方田鼠群中卵巢癌的自然发生率在成年雌性动物远远高于 其它动物，经临床与病理学观察，它们与人类相应的疾病有许多相同之处，弄清东方田鼠自发性卵巢 上皮癌的病理特点和组织学分类，了解东方田鼠卵巢癌的细胞生物学变化以及癌细胞巾相关基冈的 表达规律，这对阐明卵巢癌发病的机理有重要意义。∞1 1材料和方法 1．1 东方田鼠繁殖和封闭群的建立1994年中国科学院长沙农业现代化研究所研究人员从湖南省 洞庭湖区，捕获了40余对野生东方田鼠(长江亚种)，饲养在该所的动物室内。1998，f12B中阿大学湘 年的驯化，东方田鼠已能进行稳定的繁殖，饲养基本条件为：光照周期10h明亮、14h黑暗；室温保持 23℃；饮水供应充足；饲料中粗蛋白22％、粗脂肪3．19％、粗纤维8．41％。 基金项目：湖南省实验动物专项基金；湖南省自然科学基金资助(03]JY4070) 578 论文汇编 第六届中南地区实验动物科技交流会 1．2主要临床特征的观察 收集患病的卵巢癌东方田鼠，观察动物的发病年龄、体征、行为特征等 临床症状。 1．3病理大体解剖与组织学特征观察将自发性卵巢癌东方田鼠称_蕈=，打开胸腔和腹腔，观察心脏、 肺脏、胸腺、隔膜、肝脏、脾脏、肾脏、肠系膜淋巴结、大肠、小肠、卵巢、膀胱等脏器的自然位置、色泽、 大小，是否有粘连等，记录是否有出血、充血等。取少许病变组织置10％福尔马林固定液中，按常规进 行石腊切片．H．E染色。将肿瘤按病理组织学特征分为三级，…I(高分化)：乳头结构良好，乳头间质纤 维轴心明显；Ⅱ(中分化)：乳头较密集，单独的纤维轴心少见；llI(低分化)：乳头基本消失，肿瘤以实 性细胞巢为主。 1．4电镜形态观察 1．4．1透射电镜 LPBS缓冲液冲洗并过夜，逐级缓慢脱水，Epon812浸透和包埋，超薄切片，日立透射电镜观察，拍照。 1．4．2扫描电镜 将卵巢痛组织经适当修剪后，放人1％锇酸固定2h，取出后缓冲液漂洗3次，乙醇系列脱水，醋酸异 戊脂置模，l临界点干燥，接着用电胶把样品粘于扫描电镜样品台上，经离子溅射仪镀膜后，在JSM一 5600LV扫描电镜下进行观察、拍照。 1．5免疫组织化学检查从收集的12例东方田鼠自发性卵巢癌中取标本8例，用正常卵巢组织作对 照。标本均经10％福尔马林液固定，常规石蜡包埋，连续切片，厚41J,m。采用免疫组化sP法，按说明书进 行。实验用PBS缓冲液替代一抗作阴性对照，选用已知染色阳性的肿瘤组织切片作为阳性对照。所有 切片均先进行常规HE染色，明确病理诊断。阳性信号为棕黄色，位于胞核、胞浆或，和胞膜上，按显色 有无分为阴性和阳性，共检查了P53，HSP27，HSP70，HSP90等基因的表达情况。 2结果 2．1临床特征在东方田鼠封闭群中，先后发现有