贵州乙型肝炎病毒感染者病毒基因亚型研究.pdfVIP

组以及宫颈癌病人的分布看(表2)，与包含HPV一16的多重感染相比，单独HPV-16感染在 宫颈癌变上具有更大的危险度。 表2 单独HPVl6感染与混合其它型别与宫颈疾病的关系 从我们的研究结果表明：1)与欧美发达国家相比，北京市的门诊人群中HPV一58并H-52 两个亚型的分布较高，分别达到了15．7％和11．3％，此外，欧美国家第二位分布的HPV-18 亚型在这一人群中较为罕见，只有5．5％，排第六位。2)HPV-16亚型感染的人群中，单独感 染比混合感染对宫颈癌变具有更高的危险度。我们正在计划适当改进本研究的检测方法，进 行更大规模的分子流行病学调查，进而把握我国整体的HPV的流行趋势，为我国宫颈癌的预 防和控制提供理论基础。 贵州乙型肝炎病毒感染者病毒基因亚型研究+ 丁静娟刘悦晖王梅 贵阳医学院附院感染科实验室，贵阳，550004 l摘要】 目的调查贵州B、c基因型乙肝病毒(HBV)感染者的病毒基因亚型。方法用 PCR扩增HBV II P区长309bp的基冈片段，扩增产物分别经限制性内切酶Ncil、Vspl、BstE 酶切，琼脂糖胶电泳，根据酶切图谱多态性，建立限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检 测HBVC基因亚型的方法。直接测序确定B基因亚型。对178例用S基冈限制性片段长度 多态性鉴定为B、c基因型的不同临床类型HBV感染者进行亚型分析。结果成功建立 低，而C2亚型在各对应组中的分布逐渐增高。结论贵州B、C基因型HBV感染者中，以 C2亚型方法较简便、特异性强，适合较大样本分析，可用于流行病学调查及临床筛查。 关键词肝炎病毒，乙型；基因亚型； 限制性片段长度多态性；测序；贵州 根据核苷酸全序列或s基囚序列差异，可将乙型肝炎病毒(HBV)分为8种基因型。 分布具有一定的地理特征，且与HBV感染后的临床表现，预后及治疗应答均有联系。冈此， 分析不同地区基冈弧型的分布，对乙肝的防治具有指导意义。以前对贵州地区进行的HBV 基囚型研究，明确B、C基因型是本地区HBV感染者的主要基因型[4】，但主要基冈型的亚 型仍不清楚。为进一步明确贵州HBV基因Ⅱ型的分布，阐述基因亚型与疾病的相关性，我 们用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及直接测序，对贵州地区178例 48 慢性HBV感染者进行B、C基因亚型检测，并结合临床病期进行分析。 1对象和方法 ★基金项目：国家自然科学基金、贵州省教育厅科技基金(黔教科2003209) 作者单位：550004，贵阳，贵阳医学院附院感染科实验室，Tel：0851-6855119．3114 63．CO Email：Dingjj@vip．1 分型方法确定为B、C基冈型HBV感染病人。男性120例、女性58例，年龄在16—73岁之 问。根据2000年西安会议修订的诊断标准，其中无症状乙肝病毒携带者(ASC)50例、 慢性肝炎(CH)100例、肝炎肝硬化(LC)14例。肝细胞肝癌(Hcc)14例。 1．2血清标本收集：抽静脉血3ml，离心后取血清1．0ml用1．5mleppendorf离心管分装，冻 存丁--70℃或--20℃冰箱备用。采血同时收集临床资料。 司)、凝胶图像分析系统(上海天能公司)。 HBV 1．4 DNA模板的提取：采用匹基公司提供的方法。lOOpL血清中加入等量提取液I震荡 后再13000r／min离心10min，上清直接用于PCR扩增。 1．5HBVB基因亚型分析：用PCR产物直接测序法，具体操作见文献【5J。主要步骤为：从血 清中抽提HBV Dye测序试剂盒在377型 1592～ntl974)，产物用UniQ．10柱纯化回收后作模板，用Big DNA测序仪上直接测序(由上海生工公司协助完成)，分析所得序列的1838位核苷酸类 型，确定B亚型¨】。 1．6HBV 25mmoULMgCk2．4此、4×dNTPs2．4此、25pmoY¨LCF、CR(序列见表1)各o．5灿、