UPLC-MS研究CCI4秀导肝损伤小鼠血浆代谢组学.pdfVIP

UPLC-MS研究CCI。诱导肝损伤小鼠血浆代谢组学 姚卫峰，陈汀，张丽 (南京中医药大学药学院，江苏南京，210046) 摘要： 目的：利用代谢纽学的方法研究不同剂量CCh诱导的小鼠肝损伤模型，确定能够表征cch肝损伤模型的血浆代 谢物中的生物标记物。方接：采用基于超高效液相色谱一飞行时间质谱(UPLC．TOF．MS)I拘代谢组学技术，并结合主成分 分析的方法，研究正常小鼠和不同剂量CCh诱导的肝损伤小鼠血浆代谢物组的变化。结果：初步确定建立小鼠肝损伤血 浆代谢物研究模型的cch用量，并寻找至tJl0个具有特征性的内源性生物标记物。结论：代谢组学方法成功用于CCh诱导 的小鼠血浆肝损伤模型研究，并为进一步研究中药的保护肝脏作用奠定了基础。 关键词：代谢物组学；UPLC．TOF．MS；肝损伤；小鼠血浆；生物标记物 代谢组学(metabonomies)作为系统生物学(systemsbiology)的一个分支，是继基因组学、转录组学及蛋白质组学之后 迅速发展起来的一门学科【l】。其采用现代分析方法对动物或细胞特定生理时期内的所有相对分子质量较低的代谢物(如 氨基酸、脂肪酸、糖类、维生素和脂肪等)进行定性和定量分析，通过考察生物体系受到刺激或扰动后，其代谢物组分 或含量的变化来研究生物体系的代谢途径【甜。CCh诱导的急性动物肝损伤模型是最经典的实验性肝损伤模型【”，是保肝 药物研究的常用模型之一，其检测指标多为反映肝细胞损伤程度的酶学指标，如谷丙转氨酶及谷草转氨酶等【4】，但应用 血浆代谢组学技术结合多变量数据分析的方法研究CCh诱导的小鼠肝损伤模型。 1．材料与方法 1．1仪器 waterS Acqu崎。1M V4．1工作站；TGL．16B高速离心机。 Q-TOFmicro刑四极杆一飞行时间质谱(电喷雾离子源—Locl(Spray)；MassLynx 1．2药品与试剂 上海凌峰化学试剂有限公司)；其他试剂均为分析纯。 1．3动物 ICR种小鼠，雄性，体重(204-2)g，清洁级实验动物，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。每日给予小鼠标准 食物和饮用水各2次，实验开始前保持室内饲养l周。 1．4样品采集与制备 后13000rmin1离心15min。取上清液供UPLC-Q．TOF／MS分析。 1．5分析条件 1．5．1色谱分离 色谱柱：ACQUITY．C18柱(2．1 0．1％甲酸溶液，B液为乙腈，梯度洗脱程序(见表1)。二极管阵列紫外检测器全波长扫描，紫外检测器流出液不经分 流直接导入质谱系统检测。进样量为5乩。 183 表1梯度洗脱程序表 1．5．2质谨条静 质游为walcrs公司Micr伽1assQoTOF L／hr，源温为110(2，毛细繁电压3000V，锥孔电压 模式检测，脱溶剂气为500Uhr，脱溶剂气温度300C，锥孔气为50 溶液为锁定质量溶液。质蹙扫描范围m／z100～l，000。 l嗣撇囊 数据采用Waters 4．1软件进行色谱峰识别及峰匹配，并采用主成分分毫旰法(PCA)对各组小鼠血浆的代谢 MarkerLynx 物组迸彳亍分析。 2．结累及讨论 2．1血浆代澍耪鹩分析条静优纯 本实验中UPLC采用1．70m的色谱柱填料使得在较高的线速度下依然可以保持良好的分离效率，并考虑到节省分析时 闻、提岗分析逶羹及质谱系统对流囊的耐受性，采fflo．4mL／min的流速，又霹以不经分流将流爨液壹接罨入质谱系统进 麓体内志源毪代谢物。经遗峰识鬟褪匹配，约18404-峰鹃信惠被采集瘸子逶一步多交董数据分橱戮研究CC酗手按伤模鍪。 图l斑浆内源性伐落物的翻吃e．∞醚S典型8烈嚣 2．2CCIi谚尊导小鼠肝损伤模型的建立 采翅圭成分分辑的方法对空白缀襄CChg损伤缀小鼠懿癜浆代谢物指纹数攥进符分橱，绘剽激反映维阕裹教纛度鳇 得分图(图2)。由图上可以看出空白组和cch肝损伤组差异性显著，被明显分为两类，且不