产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件研究.pdfVIP

产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件研究 宋明徽 丛丽娜 姜启晨 刘志文 钱斯日古楞 大连工业大学，生物工程学院 [摘要]从大连海域的贝类、海鱼、海参肠中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋 细菌C6-7,经形态学鉴定和16SrDNA序列分析为枯草芽孢杆菌。将该菌株接入发酵培 养基中，30℃、160r/min、摇床培养48h，Folin酚法测定其酶活力。结果发现菌株 C6-7所产蛋白酶最造作用温度为40℃，最适作用pH值为9.0；并对该菌株产酶发酵培 养基进行了研究，通过单因素试验和正交试验，确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖 2.0％、牛肉膏1.0％、酵母粉2.0％、CaCl20.05％、NaCl1.0％，优化后菌株C6-7产碱 性蛋白酶的酶活力达到531U/mL。 [关键词]海洋细菌；碱性蛋白酶；发酵条件优化 Screeningofalkalineprotease-producingmarinebacteriastrainandstudy onfermentationconditions SONGMing-huiCONGLi-naJIANGQi-chenLIUZhi-wen [Abstract]Analkalineprotease-producingmarinebacterialstrain,namedasC6-7,wasisolatedfromsea areaofDaLian.Basedonthemorphologicaland16SrDNAsequenceanalysis,thestrainC6-7was identifiedasBacillussubtilis.Enzymeactivitiesweredeterminedafterincubatingthestrainat30℃,160 r/minfor48h.Theresultshowedthattheoptimaltemperaturewas40℃,theoptimalpHwas9.0.With singlefactortrialandorthogonalexperiment,theoptimalliquidmediumwasdeterminedasglucose 1.5％、 beefextract1.0％、 yeastpowder2.0％、 CaCl20.05％、 NaCl1％.Undertheoptimumcondition, theenzymeactivityreached531U/mL. [Keywords]marinebacterialstrain;alkalineprotease;fermentationconditions 第三届全国酶制荆研究开发应用技术研讨会论文集 降解为低分子的肽及各种氨基酸易被消化吸收，从而降低饲料对消化道的刺激，降低 应激反应，减少营养障碍，提高饲料利用率，促进生长。 水产动物大多无胃，只有消化道，无胃鱼类消化道环境呈中性或偏碱性，对无胃 鱼类饲料中添加外源酶时需注意选择适宜中性偏碱性等条件下的酶类，才能达到较佳 效果。 浩瀚的海洋以其独特和多样的生态环境，形成了独特而丰富的海洋微生物资源， 并产生种类繁多的生物活性物质。从海洋微生物中寻找特异活性的碱性蛋白酶作为饲 料添加酶更具有相容性。本文从海洋微生物中筛选高产蛋白酶优势菌株，并对其发酵 条件进行研究，旨在进一步提高菌株的产酶能力，为水产饲料添加酶的生产应用提供 理论基础。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1以大连海域采集的贝类、海鱼、海参等为试验材料。 1．1．2培养基 100mL，pH8．0。 富集培养基：蛋白胨0．19，酵母膏O．59，牛肉膏0．59，海水100mL，pH8．0。 分离培养基：干酪素l。Og，琼脂2．09，海水100mL，pH8．0。 0．59，去离子水100mL，pH8．0。 产酶发酵培养基：蛋白胨lg，牛肉膏0．39，NaCl 1．1．3主要试剂和仪器 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、琼脂粉、干酪素均购自北京奥博星生物技术有限责任公 司；其它常用试剂均来自国产试剂公司；LPZX-40SBI型立体式自动电热压力蒸汽灭菌 锅，上海申安医疗器械厂；紫外／可见光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；