深海微生物产低温淀粉酶发酵条件的研究.pdfVIP

辽宁．土壶 全国海洱生曲技术与辱耳奄番学术套议语文毒 2006．8．7．-6 深海微生物产低温淀粉酶发酵条件研究-k 戴世琨’，郑伟’，郑天凌” 1．厦一大学生命科学院环境微生物所，厦门大学，361005 2．近海海洋与环境国家重点实验室(厦门大学)，361005 摘要：从27份深海沉积物中筛选到30株产淀粉酶菌，并对其中的w7菌株的产酶条件及酶学·|生质≈ 行了研究．其最适生长温度为25(2，能适应较大范围的pH值和盐度．该菌株可利用多种碳源，但只 在淀粉存在下产酶，可利用有机氮源和无机氮源，但有机氮源更能促进淀粉酶的产生．最适产酶条件 zn”则抑制淀粉酶的产生．粗酶液的最适作用温度为40(2，最适pH值为10．0．该菌具有反硝化和氧 化活性． 关键词：深海微生物，淀粉酶，发酵条件 2l世纪是海洋经济时代，浩瀚的海洋是资源和能源的宝库，人们已经把寻找新种属或特殊性状 的微生物及其新颖代谢产物的目光转向海洋微生物，尤其是深海微生物Ⅲ。深海微生物资源已经成为 具有巨大的商业开发价值的三大深海资源之一。深海微生物处于极端的物理、化学和生态环境中，经 过长期的自然选择，形成了极为特殊的生理结构和代谢机制口n”，产生了许多具有特殊性质的生物活 性物质，极端酶类就是其中之一。淀粉酶是最早研究的酶类之一，也是一种用途广泛的工业用酶．应 用于造纸，食品．医药工业，但随着工业发展，不断要求具有新活性性质的酶类，如低温．碱性淀粉 酶。目前对深海微生物产淀粉酶的研究却鲜有报道。由于深海微生物采样、分离培养的困难等多种因 素的影响，国内外． 对深海微生物研究还处于起步阶段。本实验研究拟通过从分布于热带太平洋中部和东部的多金属结核 区深海沉积物中分离筛选产胞外淀粉酶的菌株，寻找能在低温，碱性条件下具有高酶活力的酶类，为 深海微生物资源的开发利用提供一定的工作基础。 ■ I．材料与方法 ¨样品采集 Dufresne 深海沉积物样品采集于中．法合作项目的Marion 年6月)，采样站位分布于热带太平洋中部和东部的多金属结核区，使用多管采泥器和箱式采泥器采 集。 1．2培养基 海水1000ml。pmo。 pHl0· 1．3苗种分离 依常规沉积物的菌种稀释分离方法进行分离纯化¨1． I．4淀粉鳞活力测定 酶活性的测定采HJ 692 辽宁-土t 奎国喀耳生曲技术与喀耳焉●学术套诅论文毒l006．8．2-6 淀粉产生相当于199葡萄糖的还原糖所需的酶量定义为一个酶活单位(U)。 2．结果与分析 2．1深海沉积物中微生物的分离和产淀粉酶菌株的初筛 将27个深海沉积物样品在无菌工作台内各称取1克放入已装有无菌海水和玻璃珠的三角瓶内， 株菌具有淀粉透明圈。 2．2产淀粉酶菌株的复筛 条件的酶活，经反复比较后，选用编号为w7菌株为进一步实验菌株。 w7菌株分离自站位：MC4station7；地理位置：东经134。28．79E，南纬oo。48．31S；水深1193m； 样品为硅质黏土，颜色较黑，质地较硬；时间：2001年5月9日1l时。 2．3w7菌株的细菌学鉴定 2．3．1形态特征： 2．4W7菌株产酶条件的试验 2．4．1碳源试验 2．4．2氯源试验 2．4．3盐度对产酶的影响： 2．4．4金属离子对产酶的影响 2．4．5表面活性剂对产酶的影响： 2．4．6培养时闻和温度对产酶的影响 2．5淀粉酶粗酶液的性质 2．5．1温度对酶活力的影响 2．5．2淀粉酶粗酶液的酶活摄适pH值 2．5．3淀粉酶粗酶液的热稳定性 2．6 w7菌株的其它生物学活性的研究 3．讨论 我们从深海沉积物中筛选到具有胞外淀粉酶活性的菌株30株，国内外也有从深海环境中筛选其 它胞外酶如蛋白酶等的报道，表明在深海环境中仍存在不少的有机物质【6l【“。经复筛比较，选用编号 活性达到最高，既能利用有机氮源也能利用无机氮源．以及具有反硝化活性和氨化活性，说明w7菌 株具备多种营养类型和多种能量代谢类型，能适应较广的生长条件，能在深海低氧的条件下以硝酸盐 和亚硝酸盐类作为呼吸链的最终电子受体