蔬菜农药残留快速检测方法-酶抑制法测定条件的研究.pdfVIP

·318· 食品安全的理论与实践 蔬菜农药残留快速检测方法一酶抑制法测定条件研究 舒勇，花日茂，汤锋 (安徽农业大学资源与环境学院，安徽省农产品安全重点实验室，230036) 摘要：目前农药残留的快速检测方法很多，但应用机理几乎都是以胆碱酯酶为主体，与有机磷类农药和氨基 甲酸酯类农药反应。酶反应容易受到外界条件的干扰，直接影响最终结果。本文主要是研究酶抑制法的反应条件， 使检测结果能真实地反映实际农药残留情况。 关键词：农药残留；速测；酶抑制法；乙酰胆碱酯酶 1．前 言 近些年来，由于强调经济发展，许多地区不惜以牺牲环境为代价来达到目的。生态环境的破坏，使得原有的生 态平衡被打破，农业上的病虫草害有上升势头。为了保证蔬菜产量，农药的喷药次数和用药量都以惊人的速度上 升。在杀虫剂中有机磷类农药和氨基甲酸酯类农药是主体，机磷类农药和氨基甲酸酯类农药是对人畜高毒的农药。 因此，每年由于农药残留超标而引起的人畜中毒事件屡见不鲜。调查表明，75．4％的农药中毒系由有机磷农药引起 的，其中80％为对硫磷[1]。随着人们环境意识的不断加强，由农药残留引起的食品安全问题也越来越受到人们的 关注[2]。所以要求我们要做好蔬菜农药残留的检测工作。目前农药残留检测方法很多，但是由于仪器检测方法费 时长、成本高，样品预处理繁琐n]，不能达到及时监测目的。李冶祥等在20世纪90年代初就报道了快速测定蔬菜 应时，外界反应条件会对测定结果有直接的影响，本文主要研究酶抑制法的反应条件及测定条件，使检测结果能真 实反映实际情况。避免假阳性和假阴性事件。 2．材料与方法 2．1 材科 仪，安徽无限数字技术有限公司制造；722分光光度计，上海精密科学仪器有限公司生产。 2．2 方法 当酶抑制率达到70％时，农药残留速测仪显示超标。 2．2．1酶反应时间的优化 测抑制率，速度要快，确定最佳反应时间t。 2．2．2酶反应温度的优化 · 色皿中，检测抑制率，速度要快，寻找可进行温度补偿的区域及该区域补偿公式。 2．2．3酶用量的优化 检测抑制率，速度要快，确定酶用量Vl与抑制率的关系。 2．2．4显色剂用量的优化 检测抑制率，速度要快，确定显色剂用量V2与抑制率的关系。 2．2．5底物用量的优化 · · 食品安全梭测技术 319 噩审。快速检测抑制率，确定底物粥量V3尚抑制率的关系。 2．2．6检测波长的优化 长，找出修正关系。 3。结祭与分拼 3．1 酶反应时同的优化 褒1攀霹夔反应瓣竭鲍蘩翔制睾 注：数据在5％水平上检测差异显著性．甲胺磷为10ppm，呋喃丹为5ppm。 甲胺磷的实验数据表明随着酶反应时间的延长。甲胺磷对酶的抑制率不断增大，lO分钟以虎，酶挪制率没有超 过70％，遥测仪不能检测其农药超标，13分钟以上酶抑制率明显上升超过70％，瑙反应时间达劐30分钟时，检测 酶抑制率达到98．2％，所以在检测甲胺磷时，反应时间尽可能达到30分钟，如果为了节省时间，至少要超过13分 锌。 呋哺丹与酶的反应时间从5到30分钟变化时，其抑制率在73．5％到81．8％之间变化，其抑制率都已超过 彳0％，达舞该检测仪懿检测限。由于疆碱蘸酶反应翡不稳定缝，所以实验数据有波动。在捡溺呋噫丹时，时闽延长， 对抑制率影响不大，因此可以适当缩短时间，5分钟以上即可。 3．2 鏊爱囊纛囊戆{|I{|： 表2不同温魔的酶抑树率 注：数据在5％水平上检测差募显著性，赦百虫5ppm，嚷嚷丹3ppm，甲胺磷10ppm，甲基对硫磷40ppm。 数据表明敌百虫、甲胺磷与酶的反应速度随着温度升高而升高，温度低于28℃时，敌百虫的抑制率没有超过 上蠲可，蔼检测甲胺磷残懿时溢度霹控翩程3S℃以上。 呋喃丹和甲基对硫磷的酶抑制率与温度成反比例关系。在20一41