实验性脾虚大鼠小肠结构及免疫功能改变地研究.pdfVIP

中国畜牧医学会中兽医分会2013年学术年会论文集 实验性脾虚大鼠小肠结构及免疫功能改变的研究 尹朋，余进，万长荣，徐霄龙，何莎莎，宋世秀，蒋小玉，宗振平，许剑琴+， (中国农业大学动物医学院，北京海淀100193) 摘要：目的：本试验采用利血平复制大鼠脾虚模型，观测和探讨其小肠结构与免疫功能变化。与对照 组比较结果显示，脾虚组大鼠体重显著下降(PO．05)，十二指肠、空肠和回肠的组织结构均有不同程度的 损伤，绒毛长度与肠黏膜厚度均显著降低：黏膜上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量均显著升高；绒毛顶端与 黏膜下层TLR2表达量均显著降低。表明，小肠黏膜结构损伤是脾虚动物体重下降的原因之一；局部过强的 免疫反应是造成小肠黏膜结构损伤的主要机制，且此过程并非通过TLR2介导：小肠结构损伤及TLR2表达 的显著下降均提示其抵御病原侵袭的功能下降。 关键词：脾虚，小肠黏膜结构，杯状细胞，上皮内淋巴细胞，TLR2 传统中医理论认为，脾为后天之本，主运化，为气血生化之源，现代研究认为，脾(胃) 功能涉及现代医学的消化吸收、能量代谢、神经、内分泌和免疫等多系统的功能。养殖生产 中部分动物常因先天禀赋不足、群体排序低下、消化吸收功能障碍、免疫机能低下等处于亚 健康状态，这部分动物约占健康群体的5％一10％，其整体素质难以跟上全群平均水平，表现 为时常腹泻、生产性能，机体抗病能力下降，中兽医辨证多属脾虚。中兽医脾的防卫功能与 现代兽医学中的免疫系统有相似之处，与黏膜免疫有着某种内在联系。脾虚多有肠道黏膜免 疫系统改变。研究表明，脾虚泄泻的发病机制与免疫调节有关，而消化系统的免疫作用主要 通过小肠的免疫来实现的…。本实验采用利血平复制大鼠脾虚模型，观察十二指肠、空肠、 回肠组织结构的改变，肠黏膜上皮内淋巴细胞及杯状细胞的变化以及TLR2的表达情况，揭 示脾虚大鼠小肠黏膜结构及免疫功能的变化规律，为中药调控脾虚，开发抗病促壮中药添加 剂奠定理论依据。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1试验动物健康雄性SD大鼠12只，体重250±20 g，购自北京维通利华实验动物技 术有限公司。 1…12主要试剂及仪器设备利血平(广东邦民制药厂有限公司)，免疫组化用anti—TLR2 抗体(bs—1019R，BeijingBiosynthesisBiotechnologyCo．，LTD，China)，免疫组化SABC 试剂盒(KGSP04histostain—pluskit，KeyGen (Vector RM Laboratories)；石蜡切片机(Leica 2145)，显微镜(LeicaMicrosystems， Plus Wetzlar，Germany)，Image—Pro2．1分析系统(Media Cybernetics公司)，Motic 图像分析系统。 1．2方法 1．2．1脾虚大鼠模型复制试验大鼠分为对照组和脾虚组，每组6只。试验前禁食12h， 自由饮水。脾虚组每天肌肉注射利血平0．5 mg／kg，对照组每天肌肉注射生理盐水0．5mL／ 只，连续7d。观测大鼠体重的变化及临床表现。 +代表通讯作者 21 中国畜牧医学会中兽医分会2013年学术年会论文集 1．2．2取材 造模第8天，剖杀各组试验大鼠，取十二指肠、空肠、回肠中段，用冷生理盐水冲洗干 净，立即置于4％甲醛溶液中固定。常规石蜡包埋、连续切片(3岫)，备用。 1．2．3指标检测及方法 (1)绒毛长度及黏膜厚度的测定：HE染色、光镜下观察比较对照组与脾虚组大鼠肠黏 Plus 膜形态结构，并应用Image-Pro5．1分析系统，测量十二指肠、空肠和回肠的绒毛 长度、肠黏膜厚度，脾虚组和对照组分别选取十二指肠、空肠和回肠组织切片各6张，每张 切片测量5个最长的肠绒毛长度，进行统计，取其平均值。(2)小肠上皮内淋巴细胞和杯状 细胞的测定：