CE和HPLC分离检测某些生物活性物质的荧光标记试剂及分子探针进展.pdfVIP

张华山等：CE和HPLC分离检测某些生物活性物质的荧光标记试剂及分子探针进展5 CE和HPLC分离检测某些生物活性物质的 荧光标记试剂及分子探针进展 张华山，王红 (武汉大学化学与分子科学学院，分析科学研究中心) 灵敏度和选择性是衡量分析方法优劣的两个最重要因素。高效液相色谱(HPLC)和毛 细管电泳(CE)是两种高选择性分离技术，常用于微量乃至痕量有机和生物活性物质的测 定。目前提高这两种分离方法的检测灵敏度成为分析化学的前沿研究课题。 mol／L左右，激 荧光法检测灵敏度比紫；t-／可见检测一般要高1～3个数量级，为lO。9 光诱导荧光(Laser．induced 限达10_16 激光器、半导体激光器等。其中488nm氩离子、He—Cd和半导体激光器较为常用。因此采 用荧光检测及提高被测定物质荧光量子产率是提高测定灵敏度的重要手段。但因为某些 物质本身不具有荧光或荧光太弱，需用标记或衍生试剂，使被测物质具有高灵敏的荧光检 测信号。所以研究高灵敏的荧光衍生试剂和衍生技术对CE和HPLC的高灵敏检测具有重 要意义。 生物活性物质如氨基化合物由于其广泛存在于自然界，并在生命过程中起着重要作 用，其分离检测倍受关注。氨基荧光衍生试剂按其反应类型可分为荧光生成试剂和荧光 标记试剂。现按衍生试剂的反应活性基团，对氨基化合物的荧光衍生试剂及其在HPLC和 CE中的应用进展进行综述。 1芳香邻二醛类 这类衍生试剂结构上的特征是芳香环上有两个相邻的醛或羰基，一般为荧光生成试 CA)[3j、3-(2．呋喃甲酰基)．喹啉．2．羰醛(FQCA)t4]等，结构如下。 n衄o n1叫o ＼≠∥～CHO ＼∥～≠∥、CH0 A B OPA(A)，NDA(B)，CBQCA(C)，FQCA(D)的结构 ’ OPA本身无荧光，在碱性介质中，在巯基的存在下与一级胺在数分钟内反应生成具有 nm。OPA与氨基化合物的衍生条件温 荧光的异吲哚类化合物，A。。=340nm和A。=455 和，反应迅速，但衍生物稳定性较差。其衍生物可用He．Cd激光器(325nm)检测。Ro等[5] 用OPA柱前衍生，芯片毛细管电泳分离激光诱导荧光检测了组胺等4种常见的生物胺，检 6 大会报告 2006经 测限为0．05～0．5 mg·L～。Zhang等【6 检测了生物胺、氨基酸、肽和蛋白质，并用于测定人的单个红血球中氨基化合物，检测限最 低达10曲moI·L一。 多，分别为520、591、560nm。由于生物样品中许多干扰物的发射波长在300和400nm左 右，它们与OPA相比信噪比和灵敏度有改善和提高，更有利于生物样品中氨基化合物的 测定。 X 究了U937细胞中鞘氨醇的堆积情况，检测到1105个U937细胞中含1 pmol鞘氨醇。该 方法的检测限为0．1 pmol。 及五种氨基酸，检测到平均每个细胞含有的神经递质在180amol·L-。～5．1fmol·L-1之间。 测限达nmol·L～，并将该方法用于鼠纹状体中活体微透析液的分析。 和氨基糖中。与NDA衍生反应类似，都是在CN。的作用下与氨基化合物发生反应。以 CBQCA为衍生试剂，大部分采用CE分离检测，用HPLC的很少。 3．94～4．73 nmol·L。1之间。用该方法测定人脑脊液、猪肉松和羊肉松中的肽，回收率在 80．2％～112．8％之间。 FQCA与氨基化合物的反应一般在40～65℃下反应16～50mi