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病原生物与免疫学基础 实验指导 一、实验目的 病原生物与免疫学基础实验是本课程重要组成部分,是理论与实验研究的技术基础。通过实验,加深学生对基本理论知识的理解;通过实验操作,掌握有关的基本操作技能和无菌技术,建立无菌观念;通过正确地观察和分析实验结果,培养学生实事求是的科学态度、严肃认真的工作作风及分析和解决问题的能力。 二、实验要求 1.在每次实验前必须复习相关理论知识,预习实验内容,对实验的目的、要求、方法和步骤做到心中有数。 2.实验过程中,加强无菌观念,严格无菌操作,操作时必须戴口罩,不要开风扇。 3.实验过程中,坚持实事求是,认真分析,真实记录实验结果,如实验结果与理论不符,应查找原因。 4.对实验过程与结果应认真观察并记录之,及时写出实验报告。 三、实验室规则 本门课程的实验操作对象多为病原生物,具有一定的传染性。因此,必须严格遵守实验室规则,按要求进行操作,防止发生实验室感染。 1.进入实验室应穿白大衣,离开实验室前脱下并反折放好,要经常清洗,保持洁净。 2.非实验必要的物品如书包等,不得带入实验室。带进实验室的教材和文具,要远离操 作部位,以免污染。 3.禁止在实验室内饮食、吸烟或用嘴湿润标签、铅笔等。 4.实验时不得高声谈笑和来回走动,以保证实验室的安静、有序,利于集中精力完成实验操作。 5. 实验中需要进行培养的微生物,应做好标记及处理方法。 6.要爱护室内仪器设备,按使用规则操作,并应节约使用实验材料,凡属操作不当损坏者,需报告老师,进行登记。 7.凡具有传染性的培养物、带菌材料、动物等,均需按要求处理,不得随便乱放或用水冲洗。实验室内任何物品未经许可,不得携带出室外。 8.各种实验物品应按指定地点存放,用过的玻璃器材必须放入消毒缸内,禁止随意放于桌面及冲入水槽。实验中如发生差错或意外事故时,应立即报告指导教师,及时处理,切勿隐瞒,以免发生传染。 9.实验结束,应清洁实验仪器,擦净桌面,归类放好物品,并用消毒液泡手,再以清水冲洗干净。值日生负责实验室的卫生清洁,关好水电、门窗,方可离开实验室。 10.认真观察并做好实验记录,对需连续培养观察的实验,应每次记录好观察现象和结果,以便分析并应实事求是地写好每次实验报告,实验报告要简洁、准确、清楚。 实验一 细菌形态检查 【实验目的】 1.学会:显微镜油镜的使用和保护方法 2.掌握:显微镜采光的方法要点 3.能够辨认:细菌的基本形态和特殊结构 4.学会:制备细菌涂片及革兰染色方法和结果判断 【实验内容及方法】 一、显微镜油镜的使用和保护方法(操作) (一)油镜原理 (二)油镜使用方法 (三)显微镜的保护 (一)油镜原理 细菌个体微小,必须借助显微镜油镜放大1000倍才能看到。因玻璃和香柏油折光率相近似(约为1.52),所以在玻片上加一滴香柏油,把玻片与油镜头连接,使由聚光器照射上来的光线通过玻片和香柏油时,不发生折射而直接进入透镜的光量增多,视野亮度增强,因而获得清晰的物象(实验图1-1)。 (二)油镜使用方法 1.放置显微镜 2.对光 ①聚光器上升到与载物台持平。 ②以自然光为光源时,宜用平面镜对准光源;采用人工灯光为光源时,用凹面镜对准光源。 ③光圈完全打开。 3.转换油镜头 油镜头的三个标志: ①油镜头上标有100×; ②镜头前端有白色圆圈; ③刻有“油”或“Oil”字样。 4.调节焦距 5.观察方法 6.擦镜 7.显微镜还原 (三)显微镜的保护 1.显微镜是贵重精密仪器,使用时要精心爱护,不得随意拆御和碰撞。 2.取送显微镜时应轻拿轻放,一手握镜臂,一手托镜座,防止因震动使镜头受损。 3.显微镜的调节器只能做有限的旋转,当旋转感到有阻力时应立即向反方向旋转退回,以免碰撞损坏镜头。细调节器用于焦距的细微调节,使用时转动不宜超过360o ,如需要较大幅度调节时,应使用粗调节器。 4.使用显微镜要轻拿轻放,平时放置要注意通风干燥,防尘防霉防晒。 二、细菌的基本形态和特殊结构观察(示教) (一)细菌的基本形态观察 (二)细菌的特殊结构观察 (一)细菌的基本形态观察 使用显微镜油镜,观察各种球菌、杆菌和螺形菌的革兰染色标本片,以认识细菌的基本形态。观察时应注意细菌的形状、大小、排列方式、染色性,同时绘图记录。 1.球菌 ①葡萄球菌:菌体正圆形,呈葡萄串状排列,染成紫蓝色,为革兰染色阳性球菌;②链球菌:菌体正圆形,呈链状排列,染成紫蓝色,革兰染色阳性球菌;③脑膜炎奈瑟菌:菌体肾形,成双排列,染成红色,为革兰染色阴性球菌。 2.杆菌
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