用生物反应器制备乙脑纯化灭活疫苗地研究.pdfVIP

用生物反应器制备乙脑纯化灭活疫苗的研究 衡燮温嘉纳 李佳 李桂兰 奚光跃 周健姬光任邦彦 谭振国 孙明波 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所，昆明，650118 【摘要】 目的用生物反应器制备乙脑纯化灭活疫苗的工艺研究。方法用搅拌式生物反应器培养Veto 细胞，接种并培养乙型脑炎病毒，将收获的病毒液进行灭活和纯化。结果细胞密度都增至2．4×1旷，rnl以上， 病毒滴度都7．25l吐砜／llll。结论用生物反应器制备乙脑灭活纯化疫苗的工艺合理，可以生产出高滴度的 乙型脑炎病毒液。为进一步工业化生产打下良好基础，应用前景看好。 【关键词】 乙型脑炎病毒疫苗；生物反应器；纯化；灭活 反应器 encephalitis简称乙 流行性乙型脑炎(Japanese (5)微载体：Phamacia 脑)是由乙脑病毒引起的中枢神经系统急性传染 Cytodex．1 病…，病死率约30％。乙脑病毒属黄病毒科黄病毒 6FF进 (6)纯化：采用柱层析法，使用Sepharose Fast 属病毒，病毒颗粒呈球形，直径约40nm怛J，乙脑病毒 Flow离子交换 行凝胶过滤和DEAE．Sepharose 抗原较稳定，较少变异，至今只发现一个血清型【3]。 2．方法 本病目前尚无特效治疗，注射乙脑疫苗是预防和控 (1)细胞培养：在生物反应器中加入细胞培养液 制乙脑流行的最有效手段[4’5]。 接种Vreo细胞，设定生物反应器培养条件为pH7．2， 目前应用的鼠脑提纯疫苗和地鼠肾细胞灭活疫 温度37℃，溶氧50％，搅拌速度50rpm，每天取样 苗在预防乙脑和控制乙脑流行方面起了重要作用， 进行细胞计数，4天后结束细胞培养，细胞数增至 但是由于抗原含量少，仍需多次注射才能维持有效 2．4×1旷个细胞／ml以上。共培养了三批(批号分别 的免疫状态，而且注射时有的人会发生各式各样的 为2005001、2005002、2005003) 副反应，鼠脑提纯疫苗价格也很贵不适于发展中国 (2)病毒培养：细胞培养结束后，停止搅拌，将生 家应用哺]。地鼠肾细胞减毒活疫苗(SAl414．2)n’81是 物反应器中的细胞培养液排放，加入病毒培养液和 中国独创的一种乙脑疫苗，经多年观察，该疫苗不但 乙脑P3株工作种子继续培养，设定生物反应器培养 安全，而且免疫性、保护性和持久性均良好归’10l，但 条件为pH7．4，温度35。C，溶氧20％，搅拌速度 对于小于1岁婴儿要慎用。微载体发酵罐技术现已 50rpm，每天取样测病毒滴度，第3天开始灌流收获 被广泛应用，由于Vero细胞繁殖快，可在微载体生病毒液，6天后结束培养 物反应器中进行工业化大生产，细胞、抗原产量高， (3)灭活：在病毒收获液中加福尔马林，使其最 成本较低，借于这些优势，我们对应用生物反应器培 终浓度为112000，放22。(2灭活，每天取样，灭活十天 养Veto细胞制备乙脑纯化灭活疫苗的工艺进行了后，放4℃保存。 研究。 (4)超滤浓缩：灭活后的病毒液用10万截留分 子量的超滤膜浓缩。 材料与方法