猪胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白B基因的表达和对小鼠的免疫保护效力研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分台第十二次学术研讨会 带(图2，略)． 2．2转铁结合蛋白B基因的序列分析 1)参 考序列相比较，其核苷酸同源性为99．72％。 2．3表达重组质粒的鉴定 ， pET32a(+)条带和l条约1812bp的目的条带(图3，略)． 2．4转铁结合蛋白B基因的表达及鉴定 转铁结台蛋白B与pET32a(+)的硫氧还原蛋白是融合表达．将诱导表达的蛋白进行SDs —PAGE电泳，可见一条约为84 在相应处显出特异性条带(图5，略)。 3讨论 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋是位于菌体外膜上特异性结合转铁蛋白的受 体，它由转铁结合蛋白A(TbpA)及B(TbpB)组成，通过它们的共同作用能摄取其必需的 营养物质一铁离子pJ。它们作为毒力因子和定殖因子pJ。转铁结合蛋白B(tbpB)又称为tfhA、 tbpB。它是一种通过其脂链氮端锚定在外膜上的脂蛋白，除血清型5a、5b在铁离子充足条 件下能表达少量tbpB外Il“，其它血清型只在低铁离子浓度下才表达。它能较好地诱导机体 产生型特异性抗体，其在猪体内具有杀菌活性。但不能产生交叉保护免疫。具有良好的免疫 原性，添加了此蛋白的疫苗免疫效果优于不含有该成份的常规疫苗Ilw，在疫苗的开发和应 用方面具有广阔前景． 、 本研究在大肠杆菌中成功地表达了TbpB蛋白，并且与胸膜肺炎放线杆菌高免血清呈阳 性反应，具有免疫原性，可以作为抗原使用。将此蛋白基因克隆到pET载体上能实现高效 表达，并且具有His、Tag标签，纯化非常方便。经测序比较发现TbpB基因非常保守，该 基因的克隆成功。为进一步研究TbpB蛋白的功能奠定了基础，如可以TbpB蛋白研制诊断 制剂、亚单位疫苗及制各相应的单克隆抗体等应用研究。 参考文献略 猪胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白B基因的表达及对小鼠的 免疫保护效力研究 汤君3，文心田，t三杰。黄小渡。杨利 《四川农业大学动物医学院，动物传染病与基因芯片实验室，动物疫病与人类健康四川省重点实验室 雅安625014) 摘要奉试验对APP血清I型转杖结合蛋白B基因进行表述，用ELIsA方法证明谊重组蛋白与血清2， 6型高克血清存在交夏巨应．特重组TbpB蛋白单独免疫小鼠或添加到APP血清l型甲醛灭活苗(混合免 疫组)免疫小鼠。隔两周后加强免疫，两用后采血用测定混合免疫组与1邯B蛋白免疫组的啪抗体阳转 率分别为100％．48％．二免后两周用APPl．2，6型茵l×LD轴剂量分别对混合免疫组，bpB蛋白免疫组 夏空白对腥组小置腹腔攻毒，攻毒保护率分刺为90％、87．5％、70％；100％，40％．37．5％覆lo％，20 汤君(1984．02-)，男，重庆人。硕士，主要从事预防善医学及分干生物学研究 基垒项目：四川省科技攻关重大项目(05NG002-012和05NG020．016) 133l 后补论文 ，‘、20％，站果表明重组n曲蛋白时APPl．2，6型茵具有一定的免疫保护力 关键词胸膜肺克放线杆茸：转扶结舍蛋白B；表逸；免疫保护 猪传染性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilllus pIeumpneumoni∞，APP)引起 的一种以肺炎和胸膜炎为特征的急性或慢性传染病IlI，是目前危害养猪业的三大呼吸道疾病 之一唧。其毒力因子包括荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、蛋白酶、渗透因子、溶血素和转铁 结合蛋白等(协111sfe州n billdingprdte．m，tbp)1Ⅷ。由于其血清型众多。各血清型问无交叉 免疫保护力，使得研制出能产生交叉免疫保护性的新型疫苗对于该病的防治意义重大。 传统灭活苗不能产生针对其它血清型的交叉免疫保护力。而自然感染或实验感染耐过猪 常常能抵抗其他血清型