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藏药朗庆阿塔对四氯化碳所致肝纤维化大鼠的治疗作用_药学论文 藏药朗庆阿塔对四氯化碳所致肝纤维化大鼠的治疗作用_药学论文 作者：徐晶晶，彭蕴茹，沈明勤，田耀洲 【摘要】 　　目的研究藏药朗庆阿塔治疗四氯化碳致大鼠肝纤维化的药效作用及机理。方法建立CCl4 诱导的化学性肝纤维化模型，观察藏药朗庆阿塔对肝纤维化大鼠血清的ALT，AST，ALP，TBil，LN，HA，CⅣ，PⅢNP及对大鼠肝脏指数、羟脯氨酸（Hyp）含量和肝脏病理学变化的影响。结果朗庆阿塔给药（2.85，5.7，11.4g生药/kg，ig）均显著降低模型大鼠的血清ALT，AST，ALP活性,减少血清中HA，PⅢNP和肝组织中Hyp的含量，明显改善肝脏组织的病理性损伤。结论 藏药朗庆阿塔对CCl4致大鼠肝纤维化有明显治疗作用。 【关键词】 肝纤维化 朗庆阿塔 四氯化碳 　　藏药朗庆阿塔系我国西藏自治区的藏医经典验方，由牛黄、西红花等13味药加工制成，已有五百八十多年的用药历史，是治疗肝硬化、肝腹水的特效藏药，主要功能为清热解毒、舒肝利胆、止血，用于肝硬化及肝硬化（腹水）引起的乏力，纳差，消化不良，右上腹胀闷不适，恶心等症。本文通过考察朗庆阿塔对CCl4引起的肝纤维化动物的相关指标的影响，研究朗庆阿塔对实验性肝纤维化大鼠的治疗作用，为其进一步的临床应用提供实验依据。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物SD大鼠140只，清洁级，♀♂各半，体重150～180g，购于上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：SCXK(沪)2007-0005；动物饲养环境：SPF级，合格证号：SYXK(苏)2007-0026。 　　1.2 药物与试剂朗庆阿塔(浸膏)，含生药2.3672g/ml，由江苏省中医药研究院制剂室提供，批号：070706。鳖甲软肝片：0.5g×48片， 内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司，批号四氯化碳（分析纯），上海久亿化学试剂有限公司产品，批号羟脯氨酸测试盒，由南京建成生物工程研究所提供，批号：071208。层粘连蛋白（LN）、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原（CIV）和Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢNP)放免分析药盒，北京北方生物技术研究所生产，批号：071120。 　　1.3 仪器SN-695B型智能放免γ测量仪，上海原子核研究所日环仪器一厂生产；日立7060型全自动生化分析仪，日本进口；752s型紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司生产；PHY-Ⅲ病理组织漂烘仪，常州市中威电子仪器厂。 　　2 方法［1，2］ 　　2.1 肝纤维化大鼠模型的建立取10只大鼠(♀♂各半)作为正常对照组，其余130只大鼠以15％四氯化碳溶液（将分析纯四氯化碳溶于植物油中，配成150 ml/L溶液备用）按1 ml/100 g体重灌胃，2次/周，连续7周。正常对照组同法灌胃给予等容积的溶剂植物油。造模7周时，随机取2只模型大鼠，处死后解剖取肝脏做病理组织学检查，观察是否已造成肝纤维化模型。其余模型大鼠禁食后，眼眶静脉丛采血，全自动生化分析仪测定血清ALT及AST水平。 　　2.2 分组及给药方法将上述模型大鼠依据ALT及AST水平和体重、性别随机分为5组，即模型组（30只，♀♂各半）；阳性药组（0.55g/kg），藏药低、中、高剂量组（2.85，5.7，11.4g生药/kg）。每组20只，♀♂各半。按剂量灌胃给药1次/d，给药量均为10 ml/kg，正常组和模型组则灌胃等容积的蒸馏水。每周复称体重1次，按体重相应调整给药量，连续给药10周。 　　2.3 观察指标 末次给药后，禁食(不禁水)12 h，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉采血5 ml，分离血清。 　　2.3.1 血清学指标 ALT ，AST，ALP，T-Bil，TP，ALB用全自动生化分析仪检测。血清LN，HA，CIV，PⅢNP用放免法检测。 　　2.3.2 肝组织羟脯氨酸（Hyp）测定按测试盒说明操作。 　　2.3.3 病理组织学检查取完整肝脏，称重，计算脏器系数。取相同部位肝组织用中性甲醛固定，乙醇逐级脱水，常规石蜡包埋，HE染色，观察肝脏的病理组织学改变。并采用Masson染色及VG染色观察肝组织内纤维化程度。 　　肝纤维组织增生的病理学分及标准： 　　肝组织正常（-）； 　　胶原纤维含量增加，很少形成条索分隔肝小叶，可见汇管区扙大，纤维化（+）； 　　胶原纤维呈条索状分隔肝小叶散在分布，表现为不完全分隔假小叶（++）； 　　胶原纤维呈较宽的铁丝索状分隔肝小叶，表现为完全分隔成假小叶（+++）； 　　肝细胞脂肪变性病理学分级标准。 　　肝细胞内未见空泡变性（-）；部分肝细胞（＜25％）内出现空泡（+）；较多的肝细胞（25％～50％）内出现空泡（++）；大量肝细胞（＞