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藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用_医学论文 藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用_医学论文 作者：刘辉，张筱军，吴强，董兆君 【关键词】 鱼藤酮；星型胶质细胞；活力；增殖 　　摘要： 目的 观察鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用的特点。方法 体外培养大鼠中脑星型胶质细胞，采用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光法鉴定。观察染毒星型胶质细胞形态，检测细胞活力，通过生长曲线分析鱼藤酮对星型胶质细胞增殖的影响以及RTPCR检测缝隙连接蛋白(connexin43,CX43)mRNA表达。结果 05μmol/L鱼藤酮染毒24h即可引起明显的细胞形态改变；075，10，20μmol/L鱼藤酮染毒时星型胶质细胞活力明显降低，乳酸脱氢酶释放量显著增加；05μmol/L以上鱼藤酮可明显抑制胶质细胞增殖，CX43 mRNA表达降低。结论 鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞可以产生明显的毒性损伤作用，但与神经元比较，星型胶质细胞对相同剂量的鱼藤酮染毒具有更强的耐受能力。 　　关键词： 鱼藤酮；星型胶质细胞；活力；增殖 　　Toxic effects of rotenone on primary cultured astroglia in vitro 　　Abstract： Objective To study the toxic effects induced by rotenone on primary cultured astroglia.Methods Rat astroglia were cultured and identified by glial fibrillary acid protein(GFAP).MTT assay and morphological observation were used to evaluate the toxicity of rotenone on astroglia,cell proliferation and the expression of CX43 mRNA were detected by growth curve analysis and RTPCR.Results Cell morphology was changed after being exposed to 05μmol/L rotenone for 24 hoursthe viability of cell cultures was significantly decreased after being treated with 075,10 and 20μmol/L rotenonecell proliferation was inhibited and the expression of CX43 mRNA was suppressed obviously by 05 and 10μmol/L rotenone.Conclusion Dosedependent toxic effects on primary cultured astroglia could be induced by being exposed to rotenone,but astroglia have higher tolerance to the same dose of rotenone compared with neurons. 　　Key words： rotenoneastrogliaviabilityproliferation 　　鱼藤酮(Rotenone)是典型的线粒体抑制类农药，广泛应用于农业生产中。研究证实，长期接触该类化合物可导致中枢多巴胺神经元损伤，动物产生类似帕金森病的症状，但其具体作用机制尚不完全清楚〔1，2〕。星型胶质细胞(Astroglia)是中枢神经系统数量最多、分布最广的胶质细胞，在神经系统发育、突触传递、神经组织修复与再生、神经免疫以及多种神经疾病的的病理机制等方面都起着十分重要的作用。在病理条件下，功能改变的星型胶质细胞可能是帕金森病等神经退行性疾病发生、发展的始动因素或促进因素〔3〕。本研究以原代培养星型胶质细胞为试验对象，观察体外鱼藤酮染毒对星型胶质细的毒性效应特点，以期为探讨神经退行性疾病的发病机制提供依据。 　　1 材料与方法 　　11 主要试剂和仪器 鱼藤酮(美国Sigma公司)；胎牛血清培养基(DMEM/F12)(美国Gibco公司)；类标准胎牛血清(兰州民海生物公司)；Tripure(美国Roche公司)；乳酸脱氢酶试剂盒(南京建成生物公司)；四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)(美国Amersco公司)。酶标仪(美国BIORAD公司)；PCR仪(德国Eppendorf公司)；荧光显微镜E600(日本尼