藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用_医学论文.docVIP

藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用_医学论文 藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用_医学论文 作者：林小聪，刘新光，陈小文，陈伟珠，梁念慈 【关键词】 酶动力学 Inhibitory effect of luteolin on recombinant human protein kinase CK2 holoenzyme in vitro　　【Abstract】 AIM: To observe the inhibitory effect of luteolin on recombinant human protein kinase CK2 holoenzyme and to confirm the inhibitory type by its enzyme kinetic analysis in vitro. METHODS: Recombinant human protein kinase CK2 α′ and β subunits were cloned, expressed and purified. The 2 subunits were mixed at equal molar ratio to reconstitute CK2 holoenzyme. Luteolin inhibitory effect was detected by determining the radioactivity of 32P of ［γ32P］ ATP incorporated into the CK2 substrate and CK2 kinetic analysis was carried out by using the LineweaverBurk plot. RESULTS: Luteolin was proved to inhibit strongly the holoenzyme activity of recombinant human protein kinase CK2 with IC50 of 0.86 μmol/L. Kinetic studies of luteolin on recombinant human CK2 showed that luteolin acted as an inhibitor, competitive with ATP (Ki=0.19 μmol/L) and cooperative with casein (Ki=0.11 μmol/L). CONCLUSION: Luteolin is an effective inhibitor of protein kinase CK2 in vitro. 　　【Keywords】 protein kinase CK2 recombinant proteins holoenzyme luteolin enzyme kinetics 　　【摘要】 目的：观察体外藤黄菌素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型. 方法：利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化，获得重组人CK2的α′及β亚基,并在体外等摩尔混合构成CK2全酶. 通过测定药物作用后转移到CK2底物上的［γ32P］ATP的32P的放射性活度来检测藤黄菌素对酶的抑制作用及采用LineweaverBurk作图法分析其动力学. 结果：藤黄菌素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性（IC50=0.86 μmol/L）. 酶动力学分析表明，藤黄菌素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性（Ki=0.19 μmol/L）,与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性（Ki=0.11 μmol/L）. 结论：藤黄菌素是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂. 　　【关键词】 蛋白激酶CK2； 重组蛋白； 全酶； 藤黄菌素； 酶动力学 　　0引言 　　蛋白激酶CK2全酶是由2个催化亚基(α和/或α′)及2个调节亚基(β)所组成的异源四聚体，主要有α2β2,α′2β2或αα′β2 3种形式［1-2］，具有潜在的致瘤活性并与肿瘤的发生有着密切的联系［3］. 藤黄菌素(luteolin)可能会影响CK2的活性，因此我们选择藤黄菌素作为研究对象，在已克隆、表达和纯化人CK2α′及β亚基的基础上［4-5］，探讨其对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学，为进一步寻找新型的抗肿瘤和抗病毒药物奠定良好的基础. 　　1材料和方法 　　1．1材料藤黄菌素为Aldrich公司产品. 组蛋白ⅢS，多聚谷氨酸和酪氨酸复合物［Poly(Glu∶Tyr)4∶1］，肝素，精胺和ATP购自Sigma公司. 5，6二氯1β呋喃糖苯并咪唑(DRB)为Calbiochem公司产品. P81