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基于氧电极的微生物传感器的研究进展 摘要：基于氧电极的微生物传感器是一种将微生物活细胞或细胞碎片固定在生物敏感膜上，结合电化学换能器，对被分析物具有高度选择性的装置．具有灵敏度高、检测速度快、操作简便、成本低、可进行连续动态监测等优点。对其在生物工业、环境监测领域中的应用研究进行综述．并探讨了微生物传感器的发展前景。 关键词：微生物传感器，氧电极，生物敏感膜 1生物传感器的概念和分类 生物传感器是一种用来快速检测物质的工具，它主要由生物敏感膜(或称分子设别元件)和换能器两部分组成。Turner[1]教授解释：“生物传感器是一种精致的分析器件，它结合一种生物或生物衍生物的敏感元件与一只理化换能器，能够产生间断或数字电信号，信号强度与被分析物成比例。”通俗来说，待测物质与生物敏感膜发生反应，该过程中所产生的化学变化或物理变化（如：pH变化、热量变化、压强变化等）可以间接或直接被相应的换能器识别并产生可处理的电信号，以此达到快速检测物质的目的。我们之所以将其称作为生物传感器，是因为它的重要组成器件——生物敏感膜，是由生物材料或生物衍生材料制作而成，这也是它与物理、化学等其他传感器的最大区别。因此，生物传感器与传统化学传感器和离线分析技术相比有许多明显的优势，如高选择性、高灵敏度、低成本以及能在复杂的体系中进行快速的在线连续监测[2]。 生物传感器依据生物敏感膜制作材料可大致分为微生物传感器、酶传感器、免疫传感器、组织传感器、细胞传感器、核酸传感器和分子印迹传感器。根据换能器的不同，我们还可以将其分为电化学生物传感器、光生物传感器、热生物传感器、半导体生物传感器等。 2基于氧电极的微生物传感器 2.1该类型传感器概念和工作原理 基于氧电极的微生物传感器是指在生物敏感膜上固着微生物，并且其换能器是由氧电极组装而成。1956 年 Clark[3]发表了关于氧电极的论文，首创了在待分析物内部进行监测的方法。这为后来基于氧电极微生物传感器的发明奠定了基础。该类型传感器工作原理是：测量开始时 ,膜内氧的扩散与微生物的内源呼吸速率达到平衡的时候可以测到一个稳定的电流值。当待测物质与生物敏感膜充分接触时，就会改变固定在膜上微生物的呼吸作用，导致膜内剩余氧的变化(如气压变化、浓度变化)，进而造成氧电极上电流变化。因为上述电流变化过程是受可被微生物利用的底物及其底物浓度所控制，所以传感器(氧电极)的电流信号在适宜的范围内会与不同种待测物质建立特殊联系或者与同种待测物质的浓度呈线性关系 ,借此可以进行待测物质的测定。 2.2生物敏感膜的固定化 如果说“一些重要的生命功能都是以生物膜为舞台展示出来的”，那么也可以说，没有生物功能膜就没有生物传感器。前者是指天然的生物膜，后者是指生物传感器中各种生物识别器件，包括各种固定化生物功能膜。生物传感器的常用固定化方法分为六种：夹心法、包埋法、吸附法、共价结合法、交联法和微胶囊法。其中微生物固定在膜上的常用方法有夹心法和包埋法。所谓夹心法就是将生物活性材料封闭在双层滤膜之间。该操作简单，不需要任何化学处理，固定生物量大，响应速度较快，重现性较好。而包埋法则是将微生物固定在高分子聚合物三维空间的网状结构基质中。常用的基质有琼脂、海藻酸钙凝胶、明胶和聚乙烯醇[4]。 2.3基于氧电极的微生物传感器的应用 2.3.1在生物工业中的应用 (1)同化糖测定 同化糖是指易被微生物作为营养利用的糖。测定同化糖的浓度对于发酵控制是很重要的，如高糖常会发生代谢阻遏现象，细胞丰长而产物积累少。微生物对有机物的同化能通过微生物细胞呼吸反映出来，因此可以用氧电极直接进行测定[5]。测定池中不含糖时，微生物处于基础代谢，呼吸微弱，氧浓度大，电极输出电流亦大。加入糖样品后，微生物在摄取糖的同时迅速耗氧，电极输出电流下降直至达到稳态。 1989年，张先恩等[6]将酿酒酵母菌固定在氧电极表面，用于蔗糖等低分子糖的测定，用动态法和稳态法测定糖的浓度有不同的线性响应，动态法响应范围高至100 mg／L，稳态法仅达75 mg／L，这种差异可归处于细胞与环境的综合效应，与测试搅拌速度、外部溶液的供氧能力、底物在传感器界面和细胞内的传质速率等因素有关。该微生物电极用于以蔗糖为唯一碳源的类胡萝卜素微生物发酵过程的监测。样品需要量50uL，测定结果显示醪液中蔗糖消耗与生物量增长有明显的异向同步性。 (2)乙酸测定 以乙酸为底物的微生物发酵过程中，过量的乙酸会抑制生长，须严格控制加入乙酸的浓度。Wang等报道了一种测定乙酸的酵母菌传感器[7]。这种传感器的关键是如何使酵母菌只对乙酸而不对其他营养物质（如糖类）氧化呼吸。用吸附法将云台丝孢酵母菌细胞固定在多孔醋酸纤维膜上，紧贴氧电极端部，外面再覆盖Teflon