紫外分光光操作.docVIP

目的 规范紫外光谱鉴别、分析手段，保证被测物质鉴别、测定、分析的准确性。 范围 适用于药品的定性、定量分析。 责任 质量部QC人员。 程序 1 依据 中国药典2010年版二部附录ⅣA23页和中国药品检验标准操作规范2010年版54页。 仪器的校正和检定 2.1波长 由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在波长279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的差别，使用时应注意。 2.2 吸收度的准确度 可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较,应符合表中的规定。 2.3 杂散光的检查 可按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。 试剂 浓度 %(g/ml) 测定用波长 nm 透光率 % 碘化钠 亚硝酸钠 1.00 5.00 220 340 0.8 0.8 3 对溶剂的要求 含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205 nm。另外，当溶液不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度，在220—240nm范围内不得超过0.40，在241—250nm范围内不得超过0.20，在251—300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。 ４ 测定法 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±２nm以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±２nm以内，并以吸收度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3-0.7之间为宜。仪器的狭缝波带宽度宜小于供试品吸收带的半高宽度的十分之一，否则测得的吸光度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。 当溶液的pH值对测定结果有影响时，应将供试品溶液和对照品溶液的pH值调成一致。 4.1 鉴别和检查 分别按各品种项下规定的方法进行。 4.2 含量测定 一般有以下几种方法。 4.2.1对照品比较法 按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品 溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度： CX = （AX/AR）CR 式中 CX为供试品溶液的浓度； AX为供试品溶液的吸光度； CR为对照品溶液的浓度； AR为对照品溶液的吸光度。 4.2.2 吸收系数法 按各品种项下方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。 4.2.3 计算分光光度法 计算分光光度法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。计算分光光度法一般不宜用作含量测定。 4.2.4 比色法 供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定，这种方法为比色法。 用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取