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大港高温油田产生物表活剂菌分子生物学分类试验研究.pdf

石油天然气学报(江汉石油学院学报) 2007年2月第29卷第1期 JournalofOilandGas Feb.2007V01.29No.1 Technology(J.JPI) 大港高温油田产生物表活剂菌 分子生物学分类试验研究 王正良,余跃惠,张 凡,舒福昌 (长江大学化学与环境工程学院,湖北荆州434023) 周玲革 ‘(长江大学地球化学系,湖北N]O\N434023) 李向前,张忠智 (中国石油大学(北京)化学科学与工程学院,北京102249) [摘要]从大港高温油田的注水井和油井分离得到了6株产生物表活剂菌,对这6株菌进行16SrDNA片 段扩增,克隆测序来进行分子鉴定,通过16SrDNA基因序列数据库的比对分析,对6株产表活剂菌进行 了分类,并对其系统发育情况进行了分析。分离出来的6株菌与数据库中的已知菌的同源性均超过98%, 其中两株属于土壤杆菌属(Agrobacterium),4株菌属于芽孢杆菌属(Bacillus)。 [关键词]高温油田;生物表活剂;基因序列;系统发育;同源性 [中图分类号]TE357.9 [文献标识码]A 由于原油储层具有高温、高压、厌氧等特点,因而在这种环境下分离出来的某些微生物能产生具有 特殊功能的活性物质;又由于原油储层中原油含量较高,使得原油储层相当于一种以烃类物质为碳源的 富集环境[11。由于原油储层环境的复杂性以及在该环境中微生物的不同生长特性,使得传统的菌种鉴定 难以进行,从而不利于原油储层微生物的研究和以微生物提高原油采收率(MEOR)工作的开展。随着 分子生物技术的发展,目前基于16StDNA的分子生物学方法广泛地应用于各种微生物的遗传特性和分 子差异的研究,为细菌的系统发育分类提供了有效的分子指标[2]。基于此,笔者对大港油田高温产生物 表活剂菌进行了分子生物学分类试验研究。 1分离与鉴定试验 1.1试验材料与试验仪器 1)菌株从大港油田高温注水井注入水和油井返排水中分离出来。 2)试剂酵母膏(Yeast Buffer(博采公司);V-geneDNA纯化试剂盒;PEMG-Teasyvector连接试剂盒(Promaga)。 3)仪器高温摇床;PCR仪;4℃水浴锅;凝胶成像UV系统。 1.2试验方法 1)产生物表活剂茵分离纯化方法参见文献[3]。 用酚:氯仿(1:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次,取上清。⑤将上清转移到干净离心管中, [收稿日期】2007一01—16 [基金项目]国家自然科学基金项目;湖北省教育厅国际合作重点项目(2004G002)。 [作者简介]王正良(1964一)。男,1987年大学毕业,研究员,现主要从事油田化学及提高石油采收率方面的教学和研究工作。 万方数据 第29卷第1期 王正良等:大港高温油田产生物表活剂菌分子生物学分类试验研究 后,再加入3“l的RNA酶消化RNA。 3)基因组16SrDNA片段扩增及纯化使用基因组基因16SrDNA全长扩增通用引物 基因组16Sr DNA全长。PCR扩增体系5%1,其中包括lOng 肛1)引物各3肛l、dNTP(2mmol/L)59l、10×Buffer cy- des),55℃(5 DNA cycles),50℃(15 凝胶回收试剂盒进行纯化[4]。 4)分离茵的ARDAR分型分别用HinfI和CSP6I对纯菌基因组16SrDNA全长扩增产物进行酶 Hinfl 切,酶切体系为10×Buffer I酶(或者Csp6 product400ng,用无菌水将 2肛1 I)0.4弘l(4U)PCR 反应体系的体积调整到20L,37℃酶切3~4h。将酶切产物浓缩

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