露蜂房纯化蛋白对白血病细胞形态学影响的研究_医学论文.docVIP

露蜂房纯化蛋白对白血病细胞形态学影响的研究_医学论文 露蜂房纯化蛋白对白血病细胞形态学影响的研究_医学论文 作者：时彦 张连双 赵伟 李雅娜 杨东霞 【摘要】 目的 观察中药露蜂房纯化蛋白Ⅱ(nidus vespae protein，NVP对人早幼粒白血病细胞株HL和急性髓系白血病（AML）患者骨髓单个核细胞(BMMNC)形态学的影响。方法 采用体外细胞培养，加入不同浓度NVP作用于HL细胞和AML患者BMMNC, 培养72 h后，生长曲线法测定NVP对白血病细胞增殖的影响，倒置显微镜下观察细胞生长状况,并收集细胞常规制备超薄切片，透射电子显微镜下观察HL细胞和AML患者BMMNC的超微结构。结果 光镜下NVP处理组白血病细胞数量明显减少,并出现细胞碎片；透射电镜下，NVP处理组白血病细胞出现核固缩，染色质浓缩边集，呈新月状、块状或碎裂为质膜包绕的团块，形成凋亡小体；线粒体基质深染，出现空泡样变。结论 NVP有明显诱导白血病细胞凋亡的作用，并呈现典型的细胞凋亡形态学改变。 【关键词】 露蜂房蛋白；HL细胞；骨髓单个核细胞；白血病；凋亡 【Abstract】 Objective To observe the effect of the purificated protein from Nidus Vespae(NVPⅡfor 72 hours in vitro,using growth curve to detect cell proliferation and using inverted microscope to observe the growth of leukemia cells.Transmission electronic microscope was used to observe the ultrastructural changs of the cells.Results The number of leukemia cells obviously decreased and cell fragments appeared under light microscope.Under transmission electronic microscope, typical morphological changes of apoptosis were observed among HL60 cells and BMMNC of AML patient in NVPⅡ treated groups, such as nuclear chromatin condensation and marginized to be crescent and formed apoptotic body hyperchomatin and vacuolar degeneration of mitochondria appeared.Conclusion NVPⅡ can induce typical morphologic changes of apoptosis of HL60 cells in vitro. 【Key words】 nidus vespae protein,HL60 cells,bone marrow mononuclear cells,leukemia,apoptosis 露蜂房为胡蜂科昆虫大黄蜂及同属近缘昆虫的巢，其药用历史悠久，药理作用广泛，近年来发现它对恶性肿瘤有一定的疗效［1］。在临床上，常将露蜂房与其他药物伍用治疗白血病。根据前期实验结果显示，露蜂房中含量较多的蛋白成分可以发挥抗白血病作用［2］。在此基础上，我们应用离子交换层析、透析、冻干等技术对这种蛋白成分进一步纯化，筛选出有效成分并命名为露蜂房纯化蛋白Ⅱ（NVPⅡ），将其作用于人急性早幼粒细胞白血病细胞系HL60和白血病（AML）患者骨髓单个核细胞（BMMNC），并在光电镜下观察其细胞形态学的改变。 1 材料与方法 1.1 临床资料 15例急性髓系AML患者，均系2006年10月—2007年1月潍坊市人民医院住院患者，男9例，女6例，中位年龄45(16～48)岁。病程1～180个月，平均26个月。Hb 66～120 g/L，RBC（2.45～4.12）×1012/L，WBC（6.4～78.6）×109/L，PLT（43～99）×109/L。 1.2 BMMNC的制备［3］ 无菌条件下,用骨髓穿刺针从患者髂前或髂后上棘抽取骨髓2 ml,加10 ml ACD抗凝；取10 ml椎形离心管,加入2 ml Ficoll淋巴细胞分离液(相对密度为1.077),水平离心1 000 r/min,10 min后,吸取BMMNC层细胞,