非小细胞肺癌中survivin、bcl2和bax蛋白与多药耐药基因的表达及其相关性研究_医学论文.docVIP

非小细胞肺癌中survivin、bcl和bax蛋白与多药耐药基因的表达及其相关性研究_医学论文 非小细胞肺癌中survivin、bcl和bax蛋白与多药耐药基因的表达及其相关性研究_医学论文 【摘要】 目的 检测非小细胞肺癌（NSCLC）中凋亡蛋白survivin、bcl、bax与多药耐药有关基因MDR1mRNA和MRPmRNA的表达，探讨其相互关系及意义。方法 选取113例NSCLC病例，采用原位分子杂交检测MDR1和MRP基因mRNA的表达，SP免疫组化法检测survivin、bcl、bax蛋白的表达。结果 113例NSCLC中，MDR1mRNA、MRPmRNA及survivin、bcl、bax蛋白的检出率分别为51.3%、80.5%、79.6%、59.3%、54.9%。survivin和bax的表达与肿瘤分化程度有关（P＜0.05），bcl与肿瘤组织学类型有关（P＜0.01）。MDR1mRNA与MRPmRNA（P＜0.01）、survivin与MDR1mRNA（P＜0.05）、bcl与MRPmRNA（P＜0.05）表达之间存在明显相关性。结论 凋亡抑制蛋白survivin的高表达和bcl的过表达可能是导致NSCLC原发耐药的重要因素，检测survivin和bcl对临床逆转 NSCLC多药耐药性具有指导意义。 【关键词】 肺肿瘤 多药耐药 细胞凋亡 原位杂交 免疫组织化学 　　0 引言 　　多药耐药性（multidrug resistance，MDR）是影响非小细胞肺癌（non，NSCLC）化疗效果的主要原因。大量研究表明，多药耐药机制是多因素作用、多基因改变的复杂过程。近年来，除经典的耐药途径外，细胞凋亡抑制与多药耐药的关系日益受到重视。本实验选取了113例未经治疗的NSCLC病例，用原位杂交法检测MDR1和MRPmRNA的表达，SP免疫组化法检测3种凋亡相关蛋白（survivin、bcl和bax）的表达，旨在观察NSCLC中多药耐药与细胞凋亡的关系并进一步探讨多药耐药产生的其他机制。 　　1 资料与方法 　　1．1 资料 　　收集武汉大学中南医院病理科1996～2000年间手术切除并经病理确诊的NSCLC共113例，所有病例术前均未经放化疗。其中男性91例，女性22例。年龄34～77岁，均龄56岁。鳞癌39例，腺癌61例（含细支气管肺泡癌16例），腺鳞癌13例。高分化43例，中分化47例，低分化23例。根据1997年肺癌国际分期修正系统公布的TNM分期标准，Ⅰ期52例，Ⅱ期26例，Ⅲ期11例，Ⅳ期1例，23例无记录。有淋巴结转移者37例，无淋巴结转移者53例，23例无记录。 　　1．2 方法 　　1．2．1 HE染色切片用于NSCLC组织学分类及分化程度、转移状态的判断。 　　1．2．2 原位杂交所用地高辛标记MDR1、MRP寡核苷酸探针及检测试剂盒购于武汉博士德生物公司，其操作按试剂盒说明书进行，以阳性片作阳性对照，PBS代替杂交液作阴性对照。 　　1．2．3 SP免疫组化染色按试剂盒说明操作，所用兔抗人survivin多克隆抗体、鼠抗人bcl和bax单克隆抗体购于福州迈新生物公司，均为即用型。以已知阳性片作阳性对照。PBS代替一抗作阴性对照。 　　1．3 结果判断 　　原位杂交染色中MDR1和MRPmRNA以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞。免疫组化染色中survivin、bcl和bax以胞浆呈棕黄色为阳性细胞。每例取10个高倍视野（×400），每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞所占百分比。阳性细胞数≥5%为阳性表达，＜5%为阴性表达。 　　1．4 统计学处理 　　采用SPSS12.0统计软件分析数据，结果采用χ2检验。P＜0.05为显著性检验水准。 　　2 结果 　　2．1 NSCLC中MDR1mRNA和MRP mRNA的表达及相互关系 　　113例NSCLC中，MDR1mRNA阳性表达率为51.3%（58/113），MRPmRNA阳性表达率为80.5%（91/113）。二者表达与肿瘤组织学类型、分化程度、TNM分期和有无淋巴结转移等临床病理因素均无明显关系（P＞0.05），但二者表达之间具有显著相关性（χ2＝13.72，P＜0.01）,见表1。 　　表1 113例NSCLC中MDR1和MRP mRNA表达之间的关系 （略） 　　2．2 3种凋亡相关蛋白的表达及相互关系 　　2．2．1 113例NSCLC中survivin、bcl和bax蛋白的阳性表达率分别为79.6%（90/113）、59.3%（67/113）和54.9%（62/113）。 　　2．2．2 survivin和bax蛋白的表达与肿瘤细胞分化程度明显相关（χ2＝6.74，P＜0.05；χ2＝16.39，P＜0.01）。surv