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饮酒增加广西乙醛脱氢酶2基因变异基因型携带者发生肝癌的危险性_医学论文 饮酒增加广西乙醛脱氢酶2基因变异基因型携带者发生肝癌的危险性_医学论文 作者：叶新平，彭涛，苏智雄，肖开银，尚丽明，黎乐群【摘要】 目的 研究乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因多态性与饮酒因素交互作用在广西原发性肝癌发生中的作用。方法 对广西壮族自治区300例肝癌患者和292例正常对照人群进行流行病学调查研究，并用PCR方法检测ALDH2基因型。结果 肝癌组和对照组中ALDH2变异基因型携带者分别占50.33%和47.95%（P=0.561）。肝癌人群ALDH2基因型不存在区域和民族差异（Pgt0.05）。饮酒频度每周≥3次的ALDH2*2携带者发生肝癌的危险性是饮酒频度每周lt3次的ALDH2*1携带者的3.34倍(95%CI 1.75～6.41)。 HBsAg阳性者发生肝癌的危险性明显高于HbsAg 阴性者（0.001）。结论 ALDH2基因型不构成壮汉族间肝癌发病差异的基础，频繁饮酒可能是ALDH2基因变异基因型携带者发生肝癌的危险因素。 【关键词】 乙醛脱氢酶2(ALDH2)；基因多态性；饮酒；肝肿瘤；HBV 乙醛脱氢酶2（ALDH2）是乙醛的主要代谢酶，ALDH2*1为野生型等位基因，在其12外显子发生G1510A点突变后，形成ALDH2*2。突变等位基因ALDH2*2对野生型ALDH2*1为显性，使ALDH2*2酶的活性显著降低，导致饮酒后乙醛在血中蓄积[1,2]，而乙醛被认为是乙醇的终致癌物，是引起乙醇相关癌的关键物质。本研究探讨肝癌高发区人群ALDH2基因多态性及环境因素与原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC) 易感性的关系。 1 材料与方法 1.1 对象 病例为2000年3月～2004年12月间，我院收治并经病理确诊的HCC300例，中位年龄为46.7±10.9岁，（男∶女＝265∶35）。对照为随机选取的广西地区无肝癌史的常住居民（无血缘关系），共计292例，中位年龄为47.0±10.4岁（男∶女＝261∶31）。 1.2 材料 组织标本（病例组），病例组肝癌组织手术切除后保存于-80℃；血液标本（对照组），抽取5ml外周静脉血，EDTA抗凝，分离白细胞后-20℃保存，待提DNA。病例组和对照组分别抽取2ml外周静脉血分离血清后待测HBV五项。 1.3 主要仪器及试剂 多通道PCR仪（美国MJ），凝胶电泳成像分析系统（美国Bio），Taq DNA 聚合酶、dNTPs、限制性内切酶Ksp632I均购自Ferments公司，引物购自上海生工公司。 1.4 方法 1.4.1 调查方法 采用统一的调查表，对每个研究对象进行问卷调查，内容包括一般情况、居住环境、饮酒习惯（饮酒种类、饮酒频率和持续时间）、吸烟习惯、饮食、经济状况、既往疾病及癌症家族史等。饮酒指每周饮高度白酒(乙醇含量gt40%)至少1次，连续半年以上。 1.4.2 HBV感染的检测 抽取静脉血，以800r/ min离心10min分离血清，用ELISA法测定血清中HBV五项标志(试剂盒购自华美生物工程公司)，以HBsAg阳性为HBV感染的指标。 1.4.3 ALDH2基因型检测 采用饱和酚/氯仿法提取基因组DNA。ALDH2基因型确定：(1)RFLP引物序列[3]，F:5′CAAATTACAGGGTCAACTGCT 3′,R:5′CCACACTCACAG TTTTCTCTT 3′。PCR扩增体系为20μl，内含2μl 10×buffer，0.2mM dNTP，1.5mM MgCl2，引物各0.2μM，1U Taq酶及模板5μl（80～120ng）。扩增条件为：95℃×30s→54℃×40s→72℃×40s，35个循环。(2)取PCR产物10μl，10U限制性内切酶Ksp632I，2μl buffer，37℃水浴过夜。取5μl酶切产物加1μl上样缓冲液，3%琼脂糖电泳，电压5V/cm。(3)结果判断：纯合子野生型ALDH12（G/G）被消化成112bp和23bp两条片段；纯合子变异型ALDH22（A/A），不被酶切为153bp；杂合子ALDH2*1/2（G/A）消化后三条带，153bp、112bp和23bp,见图1。 1.5 统计学分析 M为Marker，其中1、3、4、5、7为纯合野生型（G/A）， 2、6为纯合变异型（A/A）；8、9为杂合型（G/A） 图1 PCR分析ALDH2基因型 病例和对照组ALDH2基因型分布比较采用卡方检验，非条件Logistic回归模型计算相对风险度的比值比（Oddis Ratio，OR）及其95%可信区间（Confidential Interval，CI），0.05为有统计学意义，统计学