三种致泻性大肠埃希氏菌毒力基因多重PCR检测方法地研究.pdfVIP

羔羊铜缺乏症的诊治 白东英李引乾 刘晓强蒿彩菊 (1西北农林科技失学动物科技学院陕西杨陵712100； 2河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003) 本试验主要从流行病学调布、临床症状观察、病理学变化以及微晕元素测定等几方面对 送检羔羊进行诊断。流行情况和临床表现士要为：牧氏从3月上旬接羔开始有19户陆续发 现羔羊不明病冈死亡，=i：；『的产下即为死羔，有的存活10天左右死亡。发病牧区的草场有一 个共同点，即均为戈啦滩草场。母羊膘情较好，乳汁充足，发病羔羊一般体温不高，呼吸、 心跳正常，但人都比较消瘦，被毛凌乱，山现阵发性神经症状，后肢瘫痪，无法站立，死前 多数有明显的抽搞现象。剖检变化：病死羔羊血液稀薄，凝I舌1不良。人脑组织出现不同料度 的水肿、软化，脑沟变浅，颅腔内有淡黄色液体。肝脏色泽不均、舯人、质地变脆。肾被膜 易剥离，切面皮质部吡管扩张，髓质颜色呼暗红。肺脏稍肿。脊髓内有黄色胶冻样物和少鼙 黄色液体。脐胱黏膜有少擐细小山血点。镜检可见脑纽织病变明显，除轻微水肿外，脑组织 不同隧域内均出现弥漫性或局灶性软化病灶。神经细胞不同程度的变性、坏死、溶解，神经 纤维山现断裂及脱髓鞘现象。脑组织内血管周嗣辨遍Ⅲ现明显空隙，附近缃织变疏松．甚至 ‘^率网状。脊髓内出现弥敞性出血点，脊髓向质羊¨小脑髓质可见人小不等的空泡。输联管黏 膜层、I卉l有层都有不同科度出血：肾上腺皮质有人世弥漫性出血点。微量元素的测定：庹川 原子吸收光谱法测定了发病羔羊肝脏、羊毛干¨牧草中土要微肇元素含量。测定结果表明，羔 羊肿脏中铜的含世明罹低丁正常值(正常值：20-100mgg，测定平均值：0．49mg／kg)，而 锌、钼含鼙则明显升高(钼的lI：常值2-4mg／kg，测定平均值13．74mg／kg，)。特制是钼在羊毛 和牧草中的含苗也比止常值高得多(羊毛中钼的测定平均值31．35mg／kg，止常值4-26mg／kg； 牧草中的测定甲均值64．67mg／kg，正常值I-3mg／kg)牧草中的测定平均值，并且病区牧草中 铜钳的比值远远低丁临界值(2：1)。从发病羔苷的流行病学、临床表现、病理变化，以及 微鼋元素测定和治疗试验等综合分析，该不明步匕冈羔羊患的是一种继发性铜缺乏症。 三种致泻性大肠埃希氏菌毒力基因多重POR 检测方法的研究 李继昌，佟恒敏，张铁男，霍责成，刘宁 (东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030) 根据毒力闪子、致病机理及遗传特性，国际上将致泻性人肠埃希氏菌(E．coil)分为肠 sT致病基冈的作HJ引 (ETEC)、肠集聚性E．coli(EAggEC)，其中ETEC菌株通过LT平|J 104 起腹泻。EPEC的致病性与LEE毒力岛上的eaeA毒力基因有戈。EIEC的侵袭性是冈为在侵袭 性质粒上含有ipaH毒素基冈。日前采I}j的检测食品中E．coil的分离培养法刚性率低，且费 时费力{PCR技术为其快速检测提供了有力手段．但目前尚无同时检测儿种腹泻致病菌的方 和ETEC的毒力基冈，以建立一种快速检测牛奶中致泻性E．coli的PCR扩增方法。 什针对其保守区改计3对引物，分别进行PCR反席，采』l』常规琼脂糖凝股电泳检矗PCR产物， 并将其与pMDl8--18TVeceor连接，将重组质粒测序，其结果与GenBank中报道的相关毒素基 序列进行同源性比较分析，判断PcR产物的特异性。在不同退火温度，引物浓度、模板埴， 反鹿条件下进行多重PCR反应条什的优化，并进行多重PCR的特异性及灵敏度的测定，确定 最佳PCR反应条什承『体系。将牛奶中经分离培养、生化反应、血清学实验(ETEC除外)、动 物致病性实验确定的E．coil的分离凶株提取DNA，进行多重PCR反应。 eaeA)、 600bp(EIEC ST)的扩增片段，与预期结果相同。经测序，eaeA基 ipaH)和150bp(ETEC