有机介质中脂肪酶催化的手性醇拆分的探究.pdfVIP

有机介质中脂肪酶催化的手性醇拆分研究 杨立荣吴坚平 浙江大学材料与化工学院生物工程研究所，杭州，310027 联系电话：0571 E．mml：lryangt念zju．edu．en 单一构型手性药物及其中间体的合成与药理学研究是现代有机合成工业和医 药工业中的一个热点研究领域。手性药物己成为国际新药研究与开发的新方向之 一，目前手性药物市场以每年20％以上的速度增长。在农药中手性问题也很突出， 目前已商品化的650余种农药中，有170余种属于手性农药，其中含高活性手性 体成分的手性农药销售额超过100亿美元，纯手性异构体的手性农药年销售额已 接近30亿美元，手性农药占到全球农药市场的35％“’”。现代社会对单一异构体 药物需求快速增长的原因主要在于药物异构体具有不同生理活性。 利用生物催化技术进行不对称合成和外消旋体的拆分可以用于制备手性化合 物，因此具有重要的应用前景。随着有机相酶催化技术的不断成熟，在有机溶剂 中利用生物技术催化制备手性药物中间体是可以实现，且是切实可行的。 具有光学活性的醇类物质可以作为合成手性医药和农药产品的原料和中间 体，因此研究各种有机溶剂体系中脂肪酶催化的可逆或不可逆醇解反应的影响因 素及其在手性醇拆分中的应用具有重要的意义和广阔的应用前景。 我们对无溶剂体系中脂肪酶催化的不可逆转酯化反应拆分a一苯乙醇进行了 研究。乙酸乙烯酯作酰基供体并兼作溶剂，因此可以看作无溶剂体系，这对提高 目标底物的转化率十分有利。消旋n一苯乙醇中的R-对映体优先与乙酸乙烯酯发 生转酯化反应，生成R-乙酸苯乙酯，反应的副产物乙烯醇迅速异构化成乙醛，从 而使反应成为不可逆，可以使反应完全。最后得到未反应的底物S—a一苯乙醇和新 生成的产物R．乙酸苯乙酯，因此可以比较容易地分离反应混合物从而实现拆分消 旋n一苯乙醇的目的。首先从实验室保存的三十种酶中，根据反应的速率和产物 的e．e值，筛选得到22号脂肪酶为最适合的研究用酶。然后考察了不同因素对酶 反应的影响，优化了反应条件。结果表明该酶的最适条件为：底物浓度600mmol／L， 酶量为20mg，反应温度为40℃，摇床转速为150rpm。反应过程如下图所示。 强 3∞ 掰 250 一岱 罢” l”5 150 v 趟1为 疑’∞ 蔼 ∞ 笛 反应时间(口i曲 图1a底物和产物浓度随时间的变化 图】b底物和产物e．e．值随时间的变化 最佳反应条件下，(R)一a一苯乙醇的转化率为97．3％，(s)一d一苯乙醇和(R) 一a一苯乙醇乙酸酯的e．e．值分别为94．7％和99．5％。最后，还考察了该酶的重复 165 使用效率。 ＆一氰基一3一苯氧基苄醇(简称为CPBA)是一个手性分子，有R一和s一两种构型。 光学活性氰醇是～类重要的手性中间体，它很容易转化为B一氨基醇、a一羟基酸、 a一羟基酮、d一氨基酸等手性物质，因而在医药、农药、精细化工等领域有广阔的 应用前景”1。S-CPBA主要用于合成具有高杀虫活性的拟除虫菊酯杀虫剂。因此我 们就对溶剂系统中脂肪酶催化醇解反应拆分制备手性s_cPBA进行了研究。氰醇乙 应体系中一些脂肪酶可能表现出对映体选择性，优先催化S-CPBAc与另一底物醇 发生醇解反应，而R-CPBAc则不反应或反应速度要慢得多。不对称醇解反应的结 果是主要生成了S．构型的氰醇即S-CPBA，这样达到了动力学拆分消旋体(R，S) 反应，但结果也可实现(R，s)．CPBAc的手性拆分。鉴于我们所要的产物是S—CPBA， 因此我们感兴趣的是能够优先催化S-CPBAc反应的脂肪酶。 同样首先对实验室现有的三十多种脂肪酶进行筛选，从中得到催化转酯化反 应活力较高的一些酶，并对这些酶进行复筛，选出了具有较高活性和对映体选择 性的22、24、33三个酶作为后续研究用酶。其次先后进行了反应溶剂和酰基受体 (醇)的研究，确定出较佳的反应体系分别为：22号酶、四氢呋喃、甲醇。再次， 对酶反应的各种影响因素，如系统含水量、反应温度以及酶和底物的加入量等进 行了系统研究和考察，结果表明该酶反应的较适