蚯蚓纤溶酶组分B和牛胰蛋白酶抑制剂复合物的晶体结构研究.pdfVIP

2005中国科协掌术年会《生物物理与—E大疾病》分会 学术交流 蚯蚓纤溶酶组分B与牛胰蛋白酶抑制剂复合物的晶体结构研究 王室王锋望超李梅张季平常文瑞· 中国科学院生物物理研究所。生物大分子函家重点实验室 北京市朝阳区大屯路ls号．100101(wrchang(鱼,sun5．ibp．ac．cn) 蚯蚓纤溶酶是一组具有很强纤溶活力的丝氨酸蛋白酶，在东亚作为口服制剂用于血 栓病的预防与治疗。蚯蚓纤溶酶组分B(EFE-b)是从赤子爱胜蚓中分离到的高纤溶活 2．06A分辨率的晶体结构。结构分析表明EFE．b应 力组分之一。最近我们报道了EFE．b 当归类为蚯蚓的胰蛋白酶，却又具有明显有别于其它胰蛋白酶的结构特征：由两条肽链 组成：轻链N端已焦谷氨酸化；重链含有一个罕见的寡糖链，并存在一个新的结构 moti卜以顺式肽键相连的邻位半胱氨酸形成的二硫键(八员环)。 条件的筛选，最终获得了一种高质量的晶体。衍射数据处理结果表明，该数据可用到 的母体结构和已知的aprotinin结构为模型，采用分子置换法测定了复合物的晶体结构， 最终模型的R因子为21．2％，R．Free为22．6％。 而且八员环所在Loop发生了构象调整。这暗示了二硫键除了扮演决定、稳定蛋白构象 的重要角色外，还可以在酶的底物专一性中起重要的作用。进一步的结构分析还在进行 之中。 参考文献 and ofa ofearthworm fromEisenia crystallizationgroup fibrinolyticenzymes fetida，Biotechnol Lett，25(2003) 1105．1109． 2．E Structureofearthworm Wang，C．Wang，M．Li，J．P．Zhang，L．L．Gui，X．M．An，W．R．Chang．Crysml B：A two-chained fibfin01)，ticcomponentnovel，glycosylated 图l 图2 EFE—b与aprotinin复合物的晶体照片EFE-b与aprotinin复合物的整体结构 ．．98．． 2005中国科协学术年会《生物物理与t大疾病》分会 掌术交流 表lEFE-b与aprotinin复合物结晶条件与数据收集统计 池液 O．1moUL柠檬酸一柠檬酸钠，pH 6．5， 20％异丙醇，20％PE(珥000 表2 EFE-b与aprotinin复合物结构修正统计 R、v破(％) 2 Rf融(％) 2 非氢原子数 2 水分子数 2L乙相相■石钉4 平均B因子(A2) 蛋白主链 l 蛋白侧链 2殳L石2 寡糖残基 26 水 29 RMSD