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通城猪和清平猪MC5R基因多态性研究初报。
徐学文 刘榜 王彦芳 朱正茂余椿樊斌熊统安 李奎
(华中农业大学动物科技学院动物分子生物学与育种研究室,武汉,430070)
摘要黑素皮质激素受体5介导促肾上腺皮质激素与黑素细胞刺激素的外分泌调节功能.包括
I
码序列的多态性进行检测。MC5R基因HinlPCR—RFLP在通城猪中具有多态性,但在清平猪中未发
I酶切多态。
现多态性。在两品种中未发现Taq
关键词黑素皮质激素受体5;RFLP;通城猪;清平猪
黑皮质素受体(melattocortin
生理过程的调节”“1。现已鉴定出黑皮质素受体的五种亚型,其中,黑皮质紊受体5在体内分布最为广
泛。研究表明黑皮质素受体5主要在大脑和脂肪组织表达,这两个组织都与脂肪的沉积控制有关”]。
定向破坏鼠的黑皮质素受体5会导致皮脂产量的显著降低“4】,而且在人类MC5R基因的多态性主要
与肥胖表型相关”’“。
DNAs)扩增测
MC5R基因的部分表达序列。并利用不同品种个体的基因组DNA组成的池DNA(pooled
基因为影响肉质的候选基因。
本研究旨在检测中国地方猪种MC5R基因的多态性,为进一步研究MC5R基因多态性与肉质的关
系奠定基础。
l材料与方法
1.1材料
种猪场,低温保存带回实验室,一206C保存备用。
Hinl
I限制性内切酶购于大连宝生物工程有限公司。
1.2方法
1.2.IDNA的提取
血液DNA提取:常规的苯酚-氯仿抽提法提取DNA”…,TE溶解,一20‘c保存,备用。
毛囊DNA提取:取通城猪毛样,剪取毛囊(2—3mm),加入SolutionA(200retool/1NaOH)50l山煮沸
15分钟后瞬时离心;加入Solution
B(每ml中100m
荡数分钟后13
000rpm离心2min,取上清液备用。
1.2.2引物设计
360ll生囡动擅遗僮壹弛登塞进羼
件自行设计引物。该引物扩增片段长度为286bp,引物序列如下:
GCC TGGAGAACATC-3’
TGC
ForaardPrimer.5’一TCA
TCC
CGG AC·3’
GTCACGTAG
ReversePrimer:5’.ATG
引物由上海生工生物工程公司合成。
1.2.3PCR扩增
MgCl:1.2山,10斗mol/l的两引物
扩增体系组成:扩增总体系为20pA,其中10×buffer2,山,25mmol/1
各0.41xl,lOmmol/l的dNTP0.2山,Taq
程序:94℃预变性4rain;94。C30s,68。C308,726C30s,35个循环;726C延伸5rain。
1.2.4PCR产物检测与限制性酶切
I酶和HinlI酶进行限制性酶切,
应用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,然后分别用Taq
利用2%的琼脂糖凝胶检测酶切产物,拍照并记录基因型。
2结果
2.1 PCR扩增结果
扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测,呈现一条整齐的亮带,且与300bp位置接近,表明与目的
片段大小(286bp)一致。
2.2 PCR.RFLP结果
I酶切得到两条带,片段大小分别为209bp
16头清平猪DNA和15头通城猪DNA扩增产物经Taq
I酶切位点不存在多态性。扩增产物经Hinl
和77bp。群体检测结果表明Taq I酶切在15头通城猪
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