禽流感病原快速诊断与检疫研究.pdfVIP

家禽传染病 敏感性而易造成假阳性结果的出现，相对而言传统的血清学检测法，因其无需特殊设备。操作简单，耗费 较低，仍具有其不可替代的优越性。而单抗由于其高度的特异性，在临床检测中容易出现假阴性，从而影响 结果的可靠性造成误诊。因此，能获得一株广谱且特异针对某一型或亚型抗原的单抗应用于临床大规模检测 及流行病学调查是梦寐以求的。从本研究获得的数据来看，8E6单抗株正符合这种要求，能为禽流感H9 亚型的临床检测和流行病学调查提供良好试剂。 3．4在大多数动物体内制各的抗流感血清，应使用受体破坏酶(RDE)处理，以去除非特异抑制因子 影响HJ。从表l可以看出，在本实验中单抗腹水经RDE处理再稀释及单抗腹水经直接稀释与所有受检测病 毒作用，二者的反应率相差不大(0～2．4％)。单抗腹水经稀释后的反应率略高于经RDE处理再稀释的反 应率，且广谱性越强的单抗腹水株这种著异越小，分析认为可能是因为经直接稀释的倍数较大(2”)减低 了非特异性抑制因子的影响。同时，本实验中的5C7单抗由于腹水原液效价较低(数据未显示)而未经稀 验，非特异性抑制因子影响较大。因此，建议在临床检测中单抗腹水需用RDE处理，或直接经适当高倍 稀释后使用可减少非特异性抑制因子对结果的影响。 参考文献略 禽流感病原快速诊断及检疫研究 李作生，范采水，邱援，黄勇，李丽红，于富先，，郫颖，尹惠琼，王双印，李江 (成都军区军事医学研究所，云南昆明650032) 禽流感病毒是正粘病毒科流感病毒属的一个成员。流感病毒由特异的不具交叉反应的核糖核蛋臼抗原 区分为三个不同的抗原型。即A、B、c三型。其中B、C两型仅能对人致病A型可对人、猪、马和禽致病。 禽流感病毒具有A型抗原同于A型流感毒，列为禽流感病毒类。病毒颗粒呈球形、杆状或长丝状，为多形 后者有能将吸附在细胞表面上的病毒粒子解脱下来的作用。称神经氨酸酶(NA)。纤突的一端镶嵌在病 毒的脂囊膜，囊膜下面有一层膜蛋白，紧紧地包裹着呈螺旋状对称的核衣壳。核衣壳的直径为9—15nm， 之间无交叉反应。A型禽流感各亚型毒株对禽类的致病力是不同的。历史上高致病性的禽流感都是由H5 和H7引起的，但并非H5和H7都是强毒。A型流感病毒的抗原性不断发生变异，这种变异是由HA和 NA引起的，尤其是HA的变异最为常见。A型流感病毒的基因组是由分子量不同的8个单链RNA片段组 成．每个片段分别转录和复制不同的蛋白质，如果两个不同的毒株的流感病毒同时感染同一个动物细胞时， 每个病毒的8个RNA片段即可互相重组而装配成256个组台以上不同子代病毒(株)，其中有些病毒可 能是无致病力的，有些病毒可能比其两个亲代病毒对细胞具有更大的破坏性。另外，来自不同宿主的病毒 也易发生基因置换。病毒的这一特征，加之感染动物复杂，使本病的防治难度加大，这也是流行了一个世 纪的禽流感至今仍无良好的治疗和防治措施的主要原因。2004年全国范围内爆发禽流感不仅给我国的家禽 养殖业造成了巨大损失，也严重威胁人民健康。云南省是禽流感流行严重的省份之一，而且越南、柬埔寨、 泰国、老挝等东南亚许多国家和地区目前仍有家禽流行和感染人的报道。流行于我国的禽流感病毒主要为 物，不能反应疫病的分布、流行和传播动态，病毒分离鉴定周期长、成本高、需要在生物安全实验室或国 686 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 家指定的研究机构进行．难以推广应用，严重制约禽流感的防治。因此，建立快速、特异和敏感的禽流感 的诊断及检测技术，为预防、控制、根除禽流感，保障食品安全和人类健康有重要意义。 我们承担的云南省科技公关课题“禽流感病原快速诊断及检疫研究”就是应用分子生物学和免疫学技 术，建立敏感、特异快速能够区分不同亚型禽流感病毒的检测技术。应用2004年从云南爆发死亡鸡分离 抑制试验(HI)阳性。用H9上游引物AVH9fp 经鸡胚来分离培养流感病毒。将2株病毒免疫BabL／c小鼠，免疫3次后取脾，用免瘦鼠的脾细胞和骨髓 瘤细胞sp2／0融合。用山羊多抗血清包被酶标板吸附鸡胚接种分离的浓缩禽流感病毒，检测融台细胞上清 的禽流感病毒抗体。经有限稀释法克隆。分别建立了H5型病毒免疫12株和H9型病毒免疫的15株杂交 瘤细胞系。关于单克隆抗体的鉴定、纯化、标记和应用实验研究工作正在进行． 禽流感病毒分子生物学特征研究进展