溶剂诱导固相合成MAGE-2表位多肽异构的LC-MS的探究.pdfVIP

第20卷增刊 分析测试学报 v01．20 FENXI of CESHI Instrumental 2001年7月 XUEBAO(JoumM Jul．2001 Analysis) E一2表 溶剂诱导固相合成MAG 多肽异构的LC—MS研究 周 伟，吴玉章，边 疆，贾正才，唐 艳，邹丽云 (第三军医大学全军免疫学研究所，重庆400038) 近年来随着黑色素瘤特异性免疫治疗研究的不断深入，其肿瘤特异性抗原的发现及其细胞毒性T细胞 (CTL)表位的预测及鉴定成为特异性免疫治疗及其多肽疫苗研制的重要前提。预测黑色素瘤抗原基因一 的多肽，随后进行固相合成。因不同氨基酸活化方式及偶联效率的差异，通常对合成的表位多肽进行梯度反 MAGE一2众多表位多肽都表现较强的疏水性，虽然分析制备前可供疏水肽选择的有机溶剂系统较多，乙醇及 甲醇溶剂系统可能最具代表性。当用乙醇或甲醇溶解众多MAGE一2疏水性表位多肽样品后进行色谱分析时 发现，合成的MAGE一2表位多肽的RP—HPI．．C分析时，214nnl峰面积积分百分比都偏小，显示其合成时氨基 酸偶联率较低，由此色谱分析结果推出的合成的低偶联率与理论上单个氨基酸99．5％的平均偶联率差距太 大；随后的表位氨基酸组成分析也未发现有诸如半胱氨酸等可能导致折叠异构的氨基酸存在；如何消除这一 技术平台上对其反相行为作了初步的研究。 1 实验部分 HP API 1100色谱仪；PE2000质谱仪；Waters Symmetry 054 U)1 nag分 别溶于2mL乙醇、甲醇、二甲基亚砜、50％(妒)乙醇、50％(9)甲醇中，配成终浓度为0．5g／L上样溶液待用； 随后从配好的乙醇、甲醇溶样样品中各取1mL加0．1％的TFA酸化处理后待上样。HPll00HPIE反相色谱 B一100％(9)B，流速为1 样，重复2次。 2结果与讨论 min、9．43 在有异构体出现；同时由1055单电荷正子离子流可以看到1．41min出现样品穿过峰；1．41 min及 10．02 主峰离子信号强度cps都明显增强；作对照的比乙醇及甲醇极性强的DMSO溶样的样品并未发生样品穿过， 由保留时间比较MAGE一2表位多肽在反相柱上的色谱保留行为并未受到影响；因此，用乙醇、甲醇预处理 将乙醇、甲醇溶样样品酸化后的LC—MS分析发现其异构程度大为降低，样品进样时色谱穿过峰消失，样品 阳离子单电荷子离子流cps值增强。综上所述，本实验在LC—MS技术平台通过对随机选取的固相合成 214 行RP—HPLC分析仅从uvnnl峰面积积分估算其多肽合成效率将导致分析结果的严重偏差，这种偏差将 错误的反馈给前期多肽固相合成阶段；随后若以此溶剂体系预处理样品而进行RP—HPLC制备纯化，无疑在 制备过程中将因溶剂诱导的异构而丢失大量目的肽样品，造成一定程度的经济损失。既往研究表明，固相合 8 分析测试学报 第20卷增刊(2001) 醇或甲醇溶剂中的走向形成折角不同所至，这种构象的变化影响了其在