龙眼体细胞胚胎发生地研究.pdfVIP

■■■■r- 22l 睁 龙眼体细胞胚胎发生的研究① 赖钟雄 陈春玲 陈振光 (福建农业大学园艺系，福州350002) 提要 本文介绍近年来我们在龙眼俸细胞胚胎发生方面的系副研究工作。我们以龙 眼幼胚或花药为起始材料，建立了可长期继代保持的胚性愈伤组织系及其高频率体细胞胚胎发 生和植株再生体系；由松散型的胚性愈伤组织系快速建立了具有强烈体细胞胚胎发生能力的胚 性悬浮细胞系，并由之进一步建立了单细胞和原生质体的体胚发生系统。 关键词龙眼；体细胞胚胎发生；愈伤组织；悬浮细胞；单细胞；原生质体 龙眼(埘—c删20n聊L0ur．)属无患子科龙眼屑，原产中国，是一种重要的热带、亚热 带木本果树。在我国南方省份，特别是福建、广西、广东等省区的果树生产中：占有非常重要 的地位。但是，由于龙眼为多年生木本果树，常规育种局限性很大。多年来，龙眼育种工作 者一直在努力寻找龙眼育种新途径。其中，生物技术被认为是龙眼品种改良最有可能突破 的新手段。体细胞胚胎发生是植物离体培养细胞表达全能性和再生完整植株的主要途径之 一，在植物细胞工程和基因工程研究中具有重大应用价值，是生物技术研究的重要基础工 作。因此，龙眼的体细胞胚胎发生研究较早受重视。通过体细胞胚胎发生途径，已从龙眼的 幼胚子叶培养…、花药培养【“、焦核胚胎挽救l3)、叶片培养【4J等获得了再生植株。在这些研 究中一般都是先从外植体中诱导出胚性愈伤组织后再进一步诱导体细胞胚胎发生。但是， 存在胚性愈伤组织难以继代保持、体胚形成数量和分化频率偏低、胚状体畸形和玻璃化、体 胚萌发困难等问题。近年来，我们以龙眼幼胚或花药为起始材料，建立了可长期继代保持的 胚性愈伤组织系[j]，进行了高频率体细胞胚胎发生【6j和植株再生【7J研究；由松散型的胚性愈 伤组织系快速建立了具有强烈体细胞胚胎发生能力的胚性悬浮细胞系旧，9J，并由之进一步 建立了单细胞和原生质体的体胚发生系统【9““。这些研究为龙眼的生物技术育种奠定了 重要基础。现将之综合介绍如下。 l龙眼体细胞胚胎的诱导 1．1龙眼胚性愈伤组织的体细胞胚胎发生 在附加O一4．Ou∥L2，4一D的Ms培养基上，在黑暗下培养，从龙眼(红核子等品种)幼 胚或花药诱导出3种类型的胚性愈伤组织：cI、cⅡ、CⅢ类型。在不附加生长调节剂的培 ① 靠屯薨文稿刊登蓓胁。甜“pof她4山t卅Paci6c∞d唧啤m ^usⅡ寸la)． 福建省自然科学基金(c昕030)和国家自然科学摹垒赞助项目。 ■■■■1●1 养基上或同时附加2，．4一D和Ac的培养基上，形成白色、紧实的搬伤组织，即cI类型；在附 加高浓度(2．O．。4．Ot咐，IJ)2，4一D的培养基上，形成淡黄色、生长旺盛、颗粒细小且松散的 q 基或高浓度2，4一D与细胞分裂素配合，形成淡黄色、松散、生长旺盛、颗粒粗的类型，即CⅡ 类型。该类型愈伤组织有许多原胚分化，实为愈伤组织和原胚的混合物。在继代过程中，从 2，4一D与 CⅡ类型愈伤组织中可以逐步筛选出CⅢ类型愈伤组织。采用吉1．O一2．O彬L 同时含1．O。2．on。∥L2，4一D、5-彬L硝酸银的两种培养基交替培养，可使龙眼胚性愈伤组 织长期保持。 所有被诱导或筛：巷出的愈伤组织类型在分化培养基上都能形成子叶形胚状体，但胚胎 发生能力有很大差别。在含5％cw、2％蔗糖的Ms固体分化培养基上、在黑暗下培养25—