重组基因猪γ干扰素抑制PRRSV、PPV、PRV三种病毒在传代细胞上增殖地研究.pdfVIP

ofthe10th of AssociationofAnimaland Science Branch,Chinese ProceedingsSymposiumBiological Veterinary 重组基因猪7干扰素抑制PRRSV、PPV、PRV三种病毒 在传代细胞上增殖的研究 舒银辉1，漆世华1，曹瑞兵2，严运新1 (1武汉中博生化有限公司，湖北武汉430070；2南京农业大学，江苏南京210095) 殖、PRV在BHK一21细胞上增殖的影响。1000U／rid和lOOU／ml的重组猪7 TCID50和0．88 比对照降低1．69L0910 Logl0 分别比对照降低1．09LoglOTCID50和0．35Logl0 的滴度分别比对照降低2．01LoglOTCID50和O．77L0910 高浓度的干扰素作用更明显。 [关键词】 重组猪7干扰素；猪繁殖与呼吸综合征病毒；猪细小病毒；猪伪狂犬病毒；抗病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine and vires，PRRSV)是有囊膜的单股正链 reproductiverespiratorysyndrome 毒被分为美洲型和欧洲型，前者以ATCC virus(LV)为代表株，我国目前流 VR2332株为代表，后者以l_elystad 行的毒株大部分为美洲型【2J。猪细小病毒(Porcineparvovims，PPV)是细小病毒科细小病毒属成员，无囊膜， 至今只发现一个血清型[3]。猪伪狂犬病毒(PorcinePseudorabisvires，PPv)是a疱疹病毒亚科异病毒属成员， 有囊膜[3I。 重组基因猪7干扰素poIFN一7是一种高活性、多功能的生物性蛋白，具有广谱的抗病毒作用，具有强烈 的免疫调节功能，可明显提高机体抗感染的能力。对部分病毒性疫病具有良好的抑制作用，同时具有强大的 EM[4 免疫佐剂功能，能提高许多疫苗的免疫效果等。Bautista 制作用。 HB一1 本试验的目的是研究本公司研制的重组基因猪丫干扰素对PRRSVM一2株、PPVCP一99株、PRV 株等病毒，在传代细胞中增殖的影响，为进一步研究重组基因猪7干扰素的抗病毒功能，并为其在临床上猪 病防治中的应用提供试验依据。 l 材料 1．1重组基因猪7干扰素用猪7一干扰素工程菌，发酵培养收获细菌培养物，经菌体分离提取纯化后加 保护剂冷冻干燥制成，每毫克含干扰素450万国际单位。武汉中博生化有限公司研制，产品冻干并测定活性 后保存于4℃。 1．2猪繁殖与呼吸综合征病毒 惠赠。IBRS一2细胞购自中国典型物保藏中心(武汉大学)。BHK一21细胞购自中国兽药监察所。 2方法 2．1 重组猪7干扰素对PRRSV在Marc一145细胞上增殖影响试验 2．1．1PRRSV 察病变特征与出现时间，收毒后冻融2次，分装后置一80℃保存备用。参照文献[51介绍的方法，在96孔细胞 一152— 中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 板上测定PRRSV的TCID500 2．1．2重组猪7干扰素对PRRSV的抑制作用检测胰酶消化的Marc一145细胞计数后用培养液稀释到适 lml。37℃吸附1h后，弃去 24h后弃去上清，用无血清培养液洗涤细胞后，每孔加入1000TCID5。／ml的PRRSV 病毒液。每孔加入lml的含2％小牛血清的营养液，置于37℃，5％C02的培养箱继续培养至病毒对照孔的细 胞出现明显的病变(60—72h)，将24孔板在一20％冻融2次，各处理分别取3个样测定病毒滴度。 2