猕猴桃ACC氧化酶反义基因转化猕猴桃地研究.pdfVIP

1 23 猕猴桃ACC氧化酶反义基因转化猕猴桃的研究 1，2 2 3 2 2 3* 1* 田宏现 ，苑平 ，王曼玲 ，刘艺 ，李菁 ，夏新界 ，谭晓风 （1.中南林业科技大学，湖南长沙 410004；2.吉首大学，湖南吉首 416000；3.中国科学院亚热带农业生态研究所,湖南长沙 410125） 摘要:为建立猕猴桃ACC氧化酶反义基因功能研究技术平台并通过生物技术改良猕猴桃，从海沃德猕猴桃（Actinidia chinensis Planch.var.deliciosaHayward）叶片中提取总RNA，反转录合成 cDNA 第一链，并以此为模板，扩增 ACO）基因片段约1 kb，经限制性内切酶图谱分析，组建亚克隆并进行测序，其开放阅读框长957 bp， 得到ACC氧化酶 （ 编码319个氨基酸，与其他已公布的ACC氧化酶cDNA的核苷酸（AB003514.1）及氨基酸序列（BAA21541.1）同源率 分别高达94.0 %和95.6 %，证明所克隆的cDNA序列的准确性。构建该基因的反义表达载体，并通过农杆菌介导的方 法成功转化米良一号猕猴桃（Actinidia deliciosa cv.Miliang-1），得到再生苗。取14株经PCR检测，其中10株检 测到ACC氧化酶基因目的条带，阳性植株占71.4 %。实时荧光定量PCR分析结果显示，再生苗ACO 基因的表达量低 于野生型58%-81%。 关键词：ACC 氧化酶；农杆菌介导；反义表达载体；猕猴桃 Genetic Transformation of Kiwifruit with Its ACC Oxidase Antisense Gene ， 1 2 2 3 2 2 3* 1* TIAN Hong-xian , YUAN Ping , WANG Man-ling , LIU Yi , LI Jing , XIA Xin-jie , TAN Xiao-feng 1 2 （Central South University of Forestry And Technology, Changsha, Hunan 410004, China; Jishou University, Jishou , Hunan 416000, China;3Institute of Subtropical Agriculture Chinese Academy of Sciences, Changsha, Hunan 410125, China） Abstract：In order to establish the technology platform for the kiwifruit’s with Its ACC Oxidase Antisense gene functions and improve i-t through biotechnology,The kiwifruit leaves were used to clone a cDNA of ACO gene, and its sequence was analysed.. The sequence was 1003bp in length, with an open reading frame of 957bp, encording 319 amino acid residues. The DNA sequence and its deduced amino acid sequence showed 94.0 % and 95.6 % homology and smilarity with the sequences of Hayward plants in GenBank, respectively. Ten of t