毛竹PeMPEC基因的克隆与转基因研究.pdfVIP

第一部分 竹子生物学基础 毛竹 PeMPEC 基因的克隆及转基因研究1 1 1,2 1 杨丽 ，彭镇华 ，高志民 ﹡ （1．国际竹藤中心，竹藤科学与技术重点开放实验室，北京，100102; 2. 中国林业科学研究院林业研究所，北京，100091） 摘要：镁原卟啉单酯环化酶（MPEC ）是叶绿素生物合成过程中一个必不可少的关键酶。采用同源比对方法从毛竹 (Phyllostachys edulis)全长 cDNA 文库中得到 1 个 MPEC 同源基因序列（FP092998 ），命名为 PeMPEC 。该基因全长 1474 bp， 5′和 3′非编码区分别为 23 bp 和 206 bp ，编码区为 1248 bp。序列分析表明，PeMPEC 编码一个 415 aa 的蛋白，与其它高 等植物的 MPEC 蛋白具有较高的一致性，其中与水稻的 MPEC 高达 89.4%。蛋白结构分析显示，该蛋白含有一个亮氨酸 拉链和两个拷贝的 EXnDEXRH 结构域。组织特异性表达检测表明，PeMPEC 基因主要在光合器官叶片中表达。构建 PeMPEC 基因的正义、反义植物表达载体，转化拟南芥(Arabidopsis thaliana)验证其功能。结果表明，反义转基因植株生 长缓慢，叶片出现叶绿素缺乏症状，呈浅黄色；而正义转基因植株与野生型拟南芥没有明显的区别。由此表明，PeMPEC 基因参与叶绿素生物合成过程调控。 关键词：毛竹；叶绿素生物合成；镁原卟啉单酯环化酶；表达分析 Cloning and Transgenic Analysis of PeMPEC from Phyllostachys edulis 1 1,2 1 ﹡ Yang Li , Peng Zhen-hua , Gao Zhi-min (1. International Center for Bamboo and Rattan, Key Laboratory on the Science and Technology of Bamboo and Rattan, Beijing 100102; 2. Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091) Abstract: Mg-protoporphyrin IX monomethyl ester cyclase (MPEC) is an essential enzyme in chlorophyll biosynthesis pathway. A MPEC homologous gene was gained from the full length cDNA library of Phyllostachys edulis by alignment method and designed as PeMPEC (GenBank No. FP092998). The cDNA of PeMPEC was 1474 bp containing an open reading frame (ORF) of 1248 bp. The 5′-upstream and the 3′-downstream untranslated regions were 23 bp and 206 bp respectively. The ORF was predicted to encode a protein with 415 aa which had high consistency with those MPEC of other higher plants, the highest up to