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肉品中两种致病菌的双重PCR快速检测技术的研究 陈雪莲1王志琴1张晓红2翟少华2袁浩翔2秦菊2 新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052 摘要：[目的]建立一种同步检测肉品中金黄色葡萄球菌与沙门氏菌的双重聚合酶链式反应。 [方法]采用7.5％氯化钠肉汤和GN增菌剂分别对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌进行增菌， 根据金黄色葡萄球菌的femA基因与沙门氏菌的invA基因设计引物，通过PCR反应对目标 基因进行扩增，并对反应体系进行优化。[结果]特异性实验显示引物特异性良好，经双重 体外扩增体系优化显示条带清晰，无非特异性的扩增条带。[结论]结果表明双重PCR是一 种灵敏度高的快捷检测方法，可为这两种致病菌的同时检出提供新途径。 关键词：肉品；两种致病菌；双重PCR检测 ThestudyofDoublePCRrapiddetectiontechnologyoftwospecies ofpathogenicbacteriainmeatproducts CHENXuelian1WangZhiqin1*ZHANGXiao-hong2ZHAIShaohua2YUANHaoxiang2QINJu2 CollegeofAnimalMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi830052 Abstract:[Objective]AdoublePCRmethodforrapidandsensitivedetectionwas constructed,whichcandetectStaphylococcusaureusandSalmonella simultaneously.[Method] By7.5％ sodiumchloridebrothandGNincreasingagentswhichagainstStaphylococcusaureus andSalmonellaforenrichment,InadditionprimersweredesignedinaccordancewiththefemA geneofStaphylococcusaureusandSalmonellainvAgene,thetargetgenewereamplifiedby polymerasechainreaction,andfilterthereactionsystem.[Result]Specificityexperimentsshowed goodspecificityoftheprimers,andoptimizethedisplaywiththedualinvitroamplification systemisclear,nonon-specificamplifiedbands.[Conclusion]Theresultsshowthatthedouble PCRisahigh-sensitivitydetectionmethods,providenewwaysforthesetwopathogensatthe sametimedetection. 第十二届学术研讨会 77 氏阴性致病菌，目前已分出的2523个血清型，在我国已发现216个阴，并且常见的肉类食品和 奶蛋类食品都会被沙门氏菌污染，对人们的健康和生命安全将构成严重威胁【8】，在世界各地 的食物中毒中，沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位【9】，因此，研究快速简便的检测金黄 色葡萄球菌和沙门氏菌的方法，为有效的预防和控制疾病的发生有着重要的意义。 【前人研究进展】检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌主要依赖于常规微生物培养鉴定方法 [10-11]，近几年来，免疫酶技术、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、试剂盒检测等技术都在 致病菌监测方面被广泛使用‘协141，随着分子生物学技术的应用，对这两种病原菌的检测渐渐 过渡到以PCR、杂交探针及基因芯片为主的技术手段，为了同时进行多种病原菌的检测， 赵燕丽、牟晓峰、许一平等开始了双重及多重的聚合酶链式反应的尝试【15J羽，表明了PcR 技术适用于多种致病菌的同时检测。 【本研究切入点】对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌两种病原菌的传统检测方法存在耗时、 灵敏性差等缺点，选择性培养鉴定、凝固酶试验及试剂盒检测等方法也存有选择性差、易漏 检或成本偏高等瓶颈‘协201，