新试验一芦丁的提取、分离与鉴定.docVIP

实验一 芦丁的提取、精制与鉴定 一、实验目的与要求 l、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法； 2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，苷元和糖部分的鉴定方法。 R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素 芦丁溶解度：冷水1：8000 热水1：200 冷乙醇1：300 热乙醇1：30 难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。 槲皮素溶解度：冷乙醇1：650 热乙醇1：60 可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。 二、实验原理 本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和精制；芸香苷属于苷类化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李糖。芦丁和槲皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。 三、实验内容 （一）提取分离和纯化 l、芦丁的提取： 2、精制（重结晶）： 3、芦丁的水解： 流程图如下： ? 槐米（20g） 研碎，于500ml烧杯中， 加350，250ml水煮沸15min,10min 棉花过滤 提取液 放置1-1.5h 抽滤 滤液（弃去） 沉淀物（粗品芦丁） 水解 精制 1/2粗品芦丁 1/2粗品芦丁 150ml，1%H2SO4 80倍水 加热溶解，趁热抽滤 直火加热水解30min 放冷 抽滤，沉淀水洗至中性 不溶物（弃去） 滤液 放置 1-1.5h，抽滤 滤液 粗品槲皮素 精品芦丁 氢氧化钙调pH至中性 过滤 滤渣（弃去） 水解液（水浴浓缩至2ml） (二)鉴定 l、化学检识 取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml使溶解 (1)盐酸—镁粉反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加浓盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。 (2)Molish反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml，静置，观察二层溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。 (3)FeCL3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。 (4) AlCl3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加1%三氯化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。 (5)Mg(Ac)2反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加1%乙酸镁乙醇液几滴，观察颜色变化。 2、色谱鉴定 (1)槲皮素和芦丁的纸色谱鉴定 点样：取圆形滤纸，距圆心1厘米处用铅笔划一同心圆，为起始线，间隔1厘米处点样品（a,b,c,d）。将点好样品的滤纸置于培养皿中分别用展开剂①、②径向展开。 a自制芦丁乙醇液 b芦丁对照品乙醇液 c自制槲皮素乙醇液 d槲皮素对照品乙醇液。 展开剂：①正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上层) ②正丁醇—醋酸—水(4：1：5，下层) 显色：①可见光下观察色斑。 ②喷1％AlCl3乙醇液，再置紫外灯下观察荧光。 (2)糖的纸层析鉴定 点样：取圆形滤纸，同上法点样和展开（e,f,g）。 e水解液 f葡萄糖对照品水溶液 g鼠李糖对照品水溶液 展开剂：正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上层) 显色：喷洒苯胺-邻苯二甲酸，电炉上加热烘烤至色斑出现。 四，分析讨论 芦丁槲皮素和芦丁纸色谱鉴定葡萄糖鼠李糖的纸层析鉴定 1