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蛋白质浓度测定方法比较 * 基因组DNA提取及鉴定 1、0.1g 细胞→ 2ml epp，混匀。 2、＋700μl bufferA，65℃，10m’，中间混匀一次 3、＋苯酚350μl，＋氯仿350μl，混匀3m，12000rpm，5m’ 4、上清500μl 至1.5ml epp，＋500μl（等体积）氯仿，混匀3m’，12000rpm，10m’ 5、上清400μl到1.5ml epp，＋异丙醇400μl（0.7-1×），12000rpm，2m’，（掏出DNA，毛细管） 6、沉淀用70%乙醇洗2次，每次3m’ 7、自然凉干（10m’），＋30μlTE，充分溶解 8、琼脂糖凝胶电泳鉴定 一、 实验目的 学习三种蛋白质浓度的测定方法，并比较优缺点。 二、 实验原理与步骤 OH－ 磷钼酸、磷钨酸 Pr+CuSO4 →→→ Pr-Cu络合物（紫红色）→→→蓝色化合物 蛋白质测定的范围：25－250μg/mL 标准蛋白BSA 250μg/mL 测定波长：660nm 1、 Lowry法（Foling-酚法） 反应原理： 测定步骤：标准蛋白BSA 250μg/mL （1）依次向试管中加入试剂： （2）A660——[Pr]作图，求待测蛋白浓度 A660 0.5 立即振摇，30℃水浴20分钟 试剂乙（mL） 5.0 室温反应10分钟（双缩脲反应） 试