斑点杂交法检测sf9昆虫细胞残余DNA的含量.pdfVIP

技术与方法学 斑点杂交法检测 昆虫细胞残余 的含量 姚春萍周思杭李 静 北京生物制品研究所有限责任公司第七研究室 摘要 采用地高辛标记探针以核酸分子斑点杂交技术检测样品中 昆虫细胞残余其灵敏度 和结果都能较好地达到 中国药典 的要求 关键词 昆虫细胞残余 地高辛标记探针斑点杂交 基因工程重组表达技术已经广泛的应用于生 后分别取各浓度点样 与尼龙膜上 物制品的研究开发中以大肠杆菌酵母菌 昆虫 固定按说明书经封闭通过 缓冲液和 细胞杆状病毒等表达系统为代表 但是重组制 进行显色反应比较两者显色深浅从而确定 品中可能残留的宿主细胞 对人体可能产生严 标记探针的浓度 重危害 它在进入人体时理论上可能存在发生 样品处理及点膜 重组而导致肿瘤的可能因而对基因工程药物中 将纯化定量的 细胞 用 稀释至 外源 的控制具有重要意义 和 要 然后依次 倍稀释成 求基因工程制品中外源 的含量每剂量不能大 的阳性 对照系列 将 于 本文用化学标记探针即地高辛标记工 阳性对照系列 阴性对照 及样品 变性 程细胞总 片断为探针检测本研究室使用 迅速冷却 后短暂离心 然后各取 昆虫细胞杆状病毒表达的重组样品中的细胞残 用杂交点样器点样于尼龙膜上 余 细胞 固定预杂交后加入杂交液在 杂交过夜后 材料与试剂 按说明书封闭通过 缓冲液和 进行 细胞 本实验室自制 显色反应 试剂 基因组 小量试剂盒 结果 地高辛标记检测试剂盒 尼龙膜 细胞 其他生化试剂皆为分析纯 取部分 细胞 进行分光光度测定其结 方法 果是 比值为 浓度计算为 工程细胞 的制备 取 细胞按 基因组 小量试剂盒 探针标记效率的检测 制备用分光光度法测定提取的浓度并将提 探针标记效率的检测结果见图 从图中可 取 分装 冻存备用 见标记探针第 个稀释点即 点可见显色表 地高辛标记探针的制备 明标记探针达到预期的标记效率经比较两者显色 用随机启动法将地高辛标记的掺入新合 深浅可确定探针浓度为 总量为