人参β-AS基因RNAi表达载体工程菌的构建.pdfVIP

第 42卷 第 6期 吉 林 大 学 学 报 (工 学 版 ) VoL42 N0．6 2O12年 11月 JournalofJilinUniversity(EngineeringandTechnologyEdition) NOV．2O12 人参 3／-AS基因RNAi表达载体工程菌的构建 赵寿经，曹豪杰，何沐阳，王 乐 (吉林大学 生物与农业工程学院，长春 130022) 摘 要 ：利用重组 PCR和酶切连接技术构建 了人参 香树素合成酶 (AS)基 因RNAi(RNA interference，RNAi)植物表达载体 ，再经热转化法转化到发根农杆菌 A4菌株 中，得到含有人 参 As基因RNAi植物表达载体 的工程菌，为诱导转化人参外植体奠定了基础。 关键词 ：生物工程 ；人参皂苷 ；香树素合成酶；RNAi植物表达载体 ；工程菌 中图分类号 ：Q81 文献标志码 ：A 文章编号：I671—5497(2012)06一l608—05 Engineeringbacteriaconstructionofginseng／-／ASgene RNA interferenceplantexpressionvector ZHAOShou—jing，CAO Hao—jie，HEMu—yang，WANGLe (CollegeofBiologicalandAgriculturalEngineering，JilinUniversity，Changchun130022，China) Abstract：Inthisstudy，theginsengfi-ASgeneRNA interference(RNAi)plantexpressionvectoris builtthrough theRecombinantPCR reaction andrestriction enzymedigestion connection．Then，by h． eating，the ASgeneRNAiistransformedintotheAgrobacterium A4togetfl-ASRNAiplant expressionvectorengineeredbacteria．Thislaysthefoundationforfurtherinducedtransformationof ginsengexplants． Keywords：bioengineering；ginsenoside,p-AS；RNAiplantexpressionvector；engineeringbacteria 人参皂苷是人参 的主要有效成分 ，具有抗疲 RNAi技术还可 以研究 fl-AS基 因在人参皂苷合 劳、强身壮体等滋补效果 ，已得到十分广泛 的应 成途径中的功能，为研究人参皂苷合成机制奠定 用 ]。人参皂苷合成途径 中达玛烯二醇合成酶 基础 。本文利用重组 PCR和酶切连接技术 ]构 (DS)和 香树素合成酶 (AS)分别催化 2，3一氧 建了人参 p-AS基因的 RNAi植物表达载体工程 化角鲨烯生成达玛烯二醇和 香树素 ，并经羟基 菌 ，为转化人参外植体 ，开展 AS基 因的 RNAi 化和糖基化反应进一步生成达玛烷型皂苷和齐墩 和功能鉴定提供了素材。 果烷型皂苷l3]。目前认为达玛烷 型皂苷是人参 1 材料和方法 的主要活性成分 ，而齐墩果烷 型皂苷 只有 Ro一 种 ，且药理活性较低 。 1．1 材 料 通过 RNA干扰 (RNA interference，RNAi) MS固体培养基培养 3周的人参发根 ，三年 技术 。抑制人参 5-AS基 因的表达 ，可 以使代谢 人参 ，本实验室保存。发根农杆菌 A4，大肠杆菌 能量主要流向达玛烷型皂苷合成支路 ；同时，利用 JM109，p